[0021] 以下实施例用于进一步说明本发明,但不应理解为对本发明的限制。若未特别指明,实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0022] 实施例1
[0023] 1、材料和设备
[0024] 红曲霉:红曲霉CCTCC AF93208。酱香型大曲、清香型高温大曲、清香型中温酒曲:都购自梁山长久生物制曲有限公司。浓香型酒曲:泸州市龙马潭区瑞华生物制曲有限公司。
漆酶:上海鼓臣生物技术有限公司。
[0025] JXZD系列超微粉碎机:安丘市经欣粉体加工设备有限公司。超声波破碎仪LC-N-4.3:宁波立诚仪器有限公司。蒸汽爆破机QB-200:鹤壁市正道重机厂。
[0026] 2、方法
[0027] (1)培养基的配制
[0028] 红曲霉种子培养液:蔗糖10g,蛋白胨3g,K2HPO4 0.5g,1000mL水,pH 5.8,121℃灭菌20min。
[0029] 红曲霉发酵培养液:麦芽粉20g,蛋白胨1g,葡萄糖2g,MgSO4 0.5g,1000mL自来水,pH 5.8,121℃灭菌20min。
[0030] (2)酒曲的制备
[0031] 酱香型大曲、清香型高温大曲、清香型中温酒曲、浓香型酒曲分别用超声波破碎仪超声破碎20min,得到预处理的酱香型大曲、清香型高温大曲、清香型中温酒曲、浓香型酒曲。
[0032] 预处理酒曲复配曲的制备:将预处理酱香型大曲、预处理清香型高温大曲、预处理清香型中温酒曲、预处理浓香型酒曲按质量比1:1:4:2的比例复配,得到预处理酒曲复配曲。
[0033] 原酒曲复配曲的制备:将酱香型大曲、清香型高温大曲、清香型中温酒曲、浓香型酒曲按质量比1:2:4:1的比例复配,得到原酒曲复配曲。
[0034] 最终酒曲混合曲的制备:将预处理酒曲复配曲与原酒曲复配曲按质量比9:1的比例复配,得到最终酒曲混合曲。
[0035] (3)月见草花的预处理
[0036] 将市售月见草花用超声波破碎仪超微粉碎。粉碎的粉末放入蒸汽爆破机中,于1.5MPa保压6min,爆破3次。往爆破的月见草花粉末加入其质量0.1%的漆酶,加入爆破的月见草粉末3倍质量的水,35℃保温2h,得到预处理的月见草花液。
[0037] (4)发酵
[0038] 红曲霉活化:往红曲霉CCTCC AF93208试管斜面菌种中加入5mL无菌水,用接种针搅拌后接入到装有50mL种子培养液的250mL三角瓶中,35℃160r/min培养24h得到红曲霉种子液。
[0039] 红曲霉液态发酵:取2mL红曲霉种子液接入到装有50mL发酵培养液的250mL三角瓶中,35℃、160r/min发酵2d,然后加入发酵醪液质量1%的最终混合酒曲、加入发酵醪液质量0.3%的预处理月见草花液,35℃、160r/min再发酵6d,得到红曲霉发酵液。
[0040] (4)红曲霉发酵液色价和桔霉素含量的测定
[0041] 1)色素色价的测定
[0042] 醇溶性色素色价测定方法:红曲霉发酵液于5000r/min离心10min,取上清液,用70%乙醇稀释一定倍数后,60℃水浴1h,过滤;滤液再用70%乙醇稀释一定倍数后,分别测定OD505、OD465、OD410,按照色价=OD×稀释倍数/所取得发酵液体积,计算得到醇溶性红色、橙色、黄色色素的色价。
[0043] 水溶性色素色价测定方法:红曲霉发酵液于5000r/min离心10min,取上清液,用蒸馏水稀释一定倍数后,60℃水浴1h,过滤;滤液再用蒸馏水稀释一定倍数后,分别测定OD505、OD465、OD410,按照色价=OD×稀释倍数/所取得发酵液体积,计算得到水溶性红色、橙色、黄色色素的色价。
[0044] 总色价为醇溶性色素色价与水溶性色素色价的和。
[0045] 2)桔霉素含量的测定
[0046] 取红曲霉发酵液10mL于5000r/min离心10min,往上清液中加入20mL 70%乙醇溶液混匀,用0.22μm微孔滤膜过滤后依据国家标准GB/T 5009.222-2008进行高效液相色谱检测。
[0047] 测定结果为:红曲霉发酵液中色价为2.97U/mL,桔霉素含量为0.0165mg/mL。
[0048] (5)红曲酒配制
[0049] 红曲霉发酵液先5000r/min离心15min,然后用滤纸过滤,滤液与清香型基酒(四川百世缘酒业有限公司,60度)按照体积比2:7的比例勾兑,得到色泽微红、口感柔和饱满、略带浓香风味的清香型保健红曲酒。
[0050] 对比试验1
[0051] 参照实施例1,发酵2d后,发酵醪液中不加入最终混合酒曲,其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为2.82U/mL、桔霉素含量为0.0173mg/mL。
[0052] 对比试验2
[0053] 参照实施例1,发酵2d后,发酵醪液中加入的最终混合酒曲改为加入相同用量的原酒曲复配曲,其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为2.10U/mL、桔霉素含量为0.0166mg/mL。
[0054] 对比试验3
[0055] 参照实施例1,发酵2d后,发酵醪液中加入的最终混合酒曲改为加入如下不同情况的酒曲:
[0056] 加入发酵醪液质量0.9%的预处理酱香型大曲和0.1%的酱香型大曲;
[0057] 加入发酵醪液质量0.9%的预处理清香型高温大曲和和0.1%的清香型高温大曲;
[0058] 加入发酵醪液质量0.9%的预处理清香型中温大曲和0.1%的清香型中温大曲;
[0059] 加入发酵醪液质量0.9%的预处理浓香型大曲和0.1%的浓香型大曲。
[0060] 其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度和桔霉素含量对应为:色素浓度为2.12U/mL,桔霉素含量为0.0179mg/mL;色素浓度为2.10U/mL,桔霉素含量为0.0176mg/mL;色素浓度为2.69U/mL,桔霉素含量为0.0168mg/mL;色素浓度为1.98U/mL,桔霉素含量为0.0191mg/mL。
[0061] 对比试验4
[0062] 参照实施例1,发酵2d后,发酵醪液中不加入预处理月见草花液,其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为2.92U/mL、桔霉素含量为0.021mg/mL。
[0063] 对比试验5
[0064] 参照实施例1,发酵2d,发酵醪液中加入相同用量的超微粉碎的月见草花液(未经汽爆处理和漆酶处理),其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为2.91U/mL、桔霉素含量为0.019mg/mL。
[0065] 对比试验6
[0066] 参照实施例1,发酵2d,不加入终混合酒曲和预处理月见草花液,继续发酵6d,其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为2.81U/mL、桔霉素含量为0.022mg/mL。
[0067] 对比试验7
[0068] 参照实施例1,发酵2d后,发酵醪液中加入终混合酒曲和预处理月见草花液改为加入发酵醪液质量1.6%的酵母液,其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为3.11U/mL、桔霉素含量为0.0171mg/mL。
[0069] 其中,酵母液通过如下处理得到为:将50μL酿酒酵母ATCC 36859种子液接入装有5mL YEPD(蛋白胨20g/L,酵母膏10g/L,葡萄糖20g/L,pH 6.0,121℃灭菌20min)的大试管中,30℃160r/min培养8h。
[0070] 对比实验8
[0071] 参照实施例1,月见草花粉末不用漆酶处理,改用纤维素酶处理,其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为2.91U/mL、桔霉素含量为0.0179mg/mL。
[0072] 上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。