[0018] 以下实施例用于进一步说明本发明,但不应理解为对本发明的限制。若未特别指明,实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0019] 实施例1
[0020] 1、材料和设备
[0021] 红曲霉:红曲霉CCTCC AF93208菌株。中温大曲:梁山长久生物制曲有限公司。藜麦:北京天赐藜麦发展有限公司。BF7658-α淀粉酶(固体):1000u/g,邢台万达生物工程有限公司。水苔:贵州省独山县春禄农产品开发有限公司。
[0022] 超声波破碎仪LC-N-4.3:宁波立诚仪器有限公司。蒸汽爆破机QB-200:鹤壁市正道重机厂。
[0023] 2、方法
[0024] (1)原料预处理
[0025] 酒曲预处理:中温大曲20g,在38℃培养48h,得到预处理中温大曲。
[0026] 蚕茧包裹蚕蛹粉:蚕蛹用粉碎机粉碎,粉碎以后过20目筛,通过20目筛再用50目筛子筛选,在50目筛子筛网上的为粉碎的蚕蛹粉。粉碎的蚕蛹粉加入到蚕茧里面,每个蚕茧加入蚕蛹粉2g,然后用天然蚕丝缝住蚕茧口,用缝纫针缝两行密封线,针孔与针孔的距离控制在0.3mm以内。
[0027] 藜麦水解:藜麦用粉碎机粉碎,过20目筛,得到藜麦粉。藜麦粉加入到其质量2倍的灭菌冷却到室温的自来水中,然后按照每100g藜麦粉加入2g淀粉酶的量加入淀粉酶,在50℃水解3h,得到藜麦水解液。藜麦水解液用滤纸过滤,得到藜麦水解过滤液。
[0028] 水苔预处理:水苔粉碎过20目筛子,水苔粉于121℃灭菌30min,再在50℃干燥箱中干燥48h,得到预处理的水苔粉末。
[0029] 水苔粉末吸附藜麦水解过滤液:藜麦水解过滤液在121℃灭菌30min,在通风橱内冷却到室温。将冷却后的藜麦水解过滤液转入到250mL的三角瓶中,装液量为100mL,再加入藜麦水解过滤液质量1/10的预处理水苔粉末,180r/min振荡30min后在通风橱内用滤纸过滤,得到吸附藜麦水解过滤液的水苔粉末。
[0030] (2)培养基配制
[0031] 红曲霉种子培养液:麦芽粉20g,蛋白胨1g,葡萄糖4g,MgSO4 0.5g,1000mL水,pH 5.8,121℃灭菌20min。
[0032] 红曲霉发酵培养液:糙米用水浸泡过夜,沥干水分,得到湿米;市售葛根粉碎过20目筛,汽爆处理2.0MPa,保温2min,得到汽爆处理的葛根粉。每250mL三角瓶装10g湿米、12g汽爆处理的葛根粉、56mL水,121℃灭菌20min。
[0033] (3)发酵
[0034] 红曲霉活化:往红曲霉CCTCC AF93208试管斜面菌种中加入5mL无菌水,用接种针搅拌后接入到装有50mL种子培养液的250mL三角瓶中,35℃160r/min培养24h得到红曲霉种子液。
[0035] 红曲霉液态发酵:取2mL红曲霉种子液接入到装有100mL红曲霉发酵培养液的500mL三角瓶中,加入10g包裹蚕蛹粉的蚕茧,35℃、160r/min发酵2d;然后加入发酵醪液质量0.5%的预处理中温大曲,35℃、160r/min发酵2d;加入发酵醪液质量5%的吸附藜麦水解过滤液的水苔粉末,25℃、160r/min发酵6d;加入葡萄糖,使其浓度达到16g/L,然后25℃、
160r/min发酵3d,得到红曲霉发酵液。
[0036] 红曲酒制备:红曲霉发酵液离心后用滤纸过滤,过滤液为红曲酒。
[0037] (4)红曲霉发酵液色价、桔霉素含量、莫纳可林含量及总黄酮含量的测定[0038] 1)色素色价的测定
[0039] 醇溶性色素色价测定方法:红曲霉发酵液于5000r/min离心10min,取上清液,用70%乙醇稀释一定倍数后,60℃水浴1h,过滤;滤液再用70%乙醇稀释一定倍数后,分别测定OD505、OD465、OD410,按照色价=OD×稀释倍数/所取得发酵液体积,计算得到醇溶性红色、橙色、黄色色素的色价。
[0040] 水溶性色素色价测定方法:红曲霉发酵液于5000r/min离心10min,取上清液,用蒸馏水稀释一定倍数后,60℃水浴1h,过滤;滤液再用蒸馏水稀释一定倍数后,分别测定OD505、OD465、OD410,按照色价=OD×稀释倍数/所取得发酵液体积,计算得到水溶性红色、橙色、黄色色素的色价。
[0041] 总色价为醇溶性色素色价与水溶性色素色价的和。
[0042] 2)桔霉素含量的测定
[0043] 取红曲霉发酵液10mL于5000r/min离心10min,往上清液中加入20mL 70%乙醇溶液混匀,用0.22μm微孔滤膜过滤后依据国家标准GB/T 5009.222-2008进行高效液相色谱检测。
[0044] 3)莫纳可林含量的测定
[0045] 取红曲霉发酵液于5000r/min离心15min,用滤纸过滤上清液。莫纳可林含量的测定按照文献(王林等,4种培养基对红曲霉M1莫纳可林K产量影响及基因差异表达分析。食品科学学报,2016年第5期)中记载的方法。
[0046] 4)总黄酮含量的测定
[0047] 取红曲霉发酵液于5000r/min离心10min,用滤纸过滤上清液,滤液用于测定总黄酮的含量。总黄酮含量测定按照文献(汪友明等,葛根总黄酮提取工艺条件的研究,徐州工程学院学报,2007。)中记载的方法。
[0048] 测定结果为:红曲霉发酵液中色素浓度为1.84U/mL,桔霉素含量为0.0195mg/mL,莫纳可林含量为5.98mg/L,总黄酮含量为16.5mg/L。
[0049] 对比试验1
[0050] 参照实施例1,发酵时不加入10g包裹蚕蛹粉的蚕茧,其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为1.54U/mL、桔霉素含量为0.0199mg/mL、莫纳可林含量为5.18mg/L。
[0051] 对比试验2
[0052] 参照实施例1,发酵时加入的10g包裹蚕蛹粉的蚕茧改成加入10g粉碎的蚕蛹粉,其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为1.59U/mL、桔霉素含量为0.0197mg/mL、莫纳可林含量为5.27mg/L。
[0053] 对比试验3
[0054] 参照实施例1,发酵时加入的10g包裹蚕蛹粉的蚕茧改成加入10g蚕茧,其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为1.80U/mL、桔霉素含量为0.0198mg/mL、莫纳可林含量为5.02mg/L。
[0055] 对比试验4
[0056] 参照实施例1,发酵过程中不加入吸附藜麦水解过滤液的水苔粉末,其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为1.78U/mL、桔霉素含量为0.0207mg/mL、莫纳可林含量为4.95mg/L。
[0057] 对比试验5
[0058] 参照实施例1,发酵过程中加入发酵醪液质量5%的吸附藜麦水解过滤液的水苔粉末改为加入发酵醪液质量1%的藜麦水解过滤液,其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为1.88U/mL、桔霉素含量为0.0203mg/mL、莫纳可林含量为5.25mg/L。
[0059] 对比试验6
[0060] 参照实施例1,发酵过程中加入发酵醪液质量5%的吸附藜麦水解过滤液的水苔粉末改为加入发酵醪液质量1%的预处理水苔粉末,其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为1.81U/mL、桔霉素含量为0.0199mg/mL、莫纳可林含量为5.49mg/L。
[0061] 对比试验7
[0062] 参照实施例1,发酵过程中加入发酵醪液质量5%的吸附藜麦水解过滤液的水苔粉末改为加入发酵醪液质量0.5%的藜麦水解液,其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为2.08U/mL、桔霉素含量为0.0199mg/mL、莫纳可林含量为5.19mg/L。
[0063] 对比试验8
[0064] 参照实施例1,发酵过程中加入发酵醪液质量5%的吸附藜麦水解过滤液的水苔粉末改为加入发酵醪液质量0.5%的藜麦水解过滤液,其它操作同实施例1,测定的红曲霉发酵液中色素浓度为2.27U/mL、桔霉素含量为0.0189mg/mL、莫纳可林含量为5.28mg/L。
[0065] 上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。