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一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法 0 0

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申请进展

基本信息

申请人信息

代理人信息

摘要

法律状态

权利要求

说明书

专利申请流程有哪些步骤？

申请

申请号：指国家知识产权局受理一件专利申请时给予该专利申请的一个标示号码。唯一性原则。

申请日：提出专利申请之日。

2017-12-15

申请公布

申请公布指发明专利申请经初步审查合格后，自申请日（或优先权日）起18个月期满时的公布或根据申请人的请求提前进行的公布。

申请公布号：专利申请过程中，在尚未取得专利授权之前，国家专利局《专利公报》公开专利时的编号。

申请公布日：申请公开的日期，即在专利公报上予以公开的日期。

2018-07-27

授权

授权指对发明专利申请经实质审查没有发现驳回理由，授予发明专利权；或对实用新型或外观设计专利申请经初步审查没有发现驳回理由，授予实用新型专利权或外观设计专利权。

2020-11-17

预估到期

发明专利权的期限为二十年，实用新型专利权期限为十年，外观设计专利权期限为十五年，均自申请日起计算。专利届满后法律终止保护。

2037-12-15

基本信息

有效性	有效专利	专利类型	发明专利
申请号	CN201711352297.8	申请日	2017-12-15
公开/公告号	CN108238680B	公开/公告日	2020-11-17
授权日	2020-11-17	预估到期日	2037-12-15
申请年	2017年	公开/公告年	2020年
缴费截止日
分类号	C12N1/20 、C02F101/20 、C12R1/01	主分类号	C12N1/20
是否联合申请	独立申请	文献类型号	B
独权数量	1	从权数量	8
权利要求数量	9	非专利引证数量	0
引用专利数量	5	被引证专利数量	0
非专利引证
引用专利	CN107285480A、CN103540551A、CN107265612A、CN107459144A、JP2007029917A	被引证专利
专利权维持	4	专利申请国编码	CN
专利事件		事务标签	公开、实质审查、授权

申请人信息

申请人	浙江海洋大学	第一申请人	浙江海洋大学
专利权人	浙江海洋大学	当前专利权人	浙江海洋大学
发明人	穆军、杨桥、冯丽娟、陈庆国、阳广凤	第一发明人	穆军
地址	浙江省舟山市定海区临城街道海大南路1号	邮编	316022
申请人数量	1	发明人数量	5
申请人所在省	浙江省	申请人所在市	浙江省舟山市

代理人信息

代理机构

专利代理机构是经省专利管理局审核，国家知识产权局批准设立，可以接受委托人的委托，在委托权限范围内以委托人的名义办理专利申请或其他专利事务的服务机构。

杭州杭诚专利事务所有限公司

代理人

专利代理师是代理他人进行专利申请和办理其他专利事务，取得一定资格的人。

尉伟敏

摘要

本发明属于絮凝剂制备技术领域。本发明公开了一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法，其包括菌种培养、发酵培养、改性膨润土沉降、干燥等步骤，其中复配菌剂由从菲律宾蛤仔吐出的污泥中分离提纯获得的速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032复配制得。通过本发明中的由速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032制得的复配菌剂及相应方法制备获得的絮凝剂具有高絮凝率的特点，同时其性能稳定、无毒副作用、安全性高、生产简单、成本低廉，可以作为废水絮凝剂使用。

摘要附图
说明书附图：[0008]
说明书附图：[0011]

法律状态

序号	法律状态公告日	法律状态	法律状态信息
1	2020-11-17	授权
2	2018-07-27	实质审查的生效	IPC(主分类): C02F 3/34 专利申请号: 201711352297.8 申请日: 2017.12.15
3	2018-07-03	公开

权利要求

权利要求书是申请文件最核心的部分，是申请人向国家申请保护他的发明创造及划定保护范围的文件。

1.一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法，其特征在于：所述的复配菌剂由速生杆菌菌株Celeribacter sp. GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp. GHF1032组成，包括以下步骤，
a）将速生杆菌菌株Celeribacter sp. GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp. GHF1032的菌种分别接种到固体培养基上，然后分别加入无菌水制成GHF1031菌种液和GHF1032菌种液；
b）将两种菌种液混合制得混合菌液，然后接种到液体培养基中发酵培养制得发酵菌液；
c）向发酵菌液中加入改性膨润土并继续发酵培养制得原料液；
d）将原料液静置沉降，然后分离沉降物，将沉降物干燥后制得絮凝剂；
所述速生杆菌菌株Celeribacter sp. GHF1031已于2017年11月16日向中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心提交保藏，保藏地址：中国，北京，中国科学院微生物研究所，保藏编号CGMCC No. 14920，建议的分类命名为Celeribacter baekdonensis；所述白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp. GHF1032已于2017年11月16日向中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心提交保藏，保藏地址：中国，北京，中国科学院微生物研究所，保藏编号CGMCC No. 14919，建议的分类命名为Albirhodobacter marinus。

2.根据权利要求1所述的一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法，其特征在于：
所述液体培养基由以下重量百分比的组分在50～60℃下混合配制而成，秸秆水解液
200～260mL /L、尿素0.4～0.6g/L、硫酸铵0.1～0.3g/L、酵母膏0.4～0.6g/L、磷酸氢二钾
3.8～4.0g/L、磷酸二氢钾1.5～2.5g/L、柠檬酸三钠
0. 5～1.5g/L、蛋白胨2～3 g/L、硫酸铵0.2～0.3g/L，余量为陈化海水。

3.根据权利要求1所述的一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法，其特征在于：
所述的固体培养基为斜面培养基，其由在液体培养基中添加琼脂并凝固后制得，琼脂的添加量为液体培养基重量的1.5～2.0wt%。

4.根据权利要求1所述的一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法，其特征在于：
所述的秸秆水解液由以下方法制得，将新鲜的芦苇用水清洗2～3次，然后将其切成12～17cm长的小段并在100～110℃下干燥，干燥后将其粉碎至粒径为0.5～1cm，制得干燥芦苇颗粒，将干燥芦苇颗粒浸泡在其重量7～11倍的重量浓度为1.7wt%稀硫酸中，并在115～
125℃下高温反应100～140分钟制得混合液，接着将混合液过滤制得秸秆水解液。

5.根据权利要求1所述的一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法，其特征在于：
所述的改性膨润土由以下方法制得，将膨润土与膨润土重量1.0～1.5倍重量的
1.5mol/L草酸氢钾溶液混合后以1000～2000rpm转速下球磨1～1.5小时，静置1～2小时制得膨润土混合浆，将膨润土混合浆干燥并在300～400℃下处理40～60分钟冷却后粉碎制得改性膨润土。

6.根据权利要求1所述的一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法，其特征在于：
所述步骤a中，速生杆菌菌株的培养温度为25～30℃，培养时间为36～48小时，所加无菌水的体积为固体培养基的1.2～1.5倍；白色红杆菌菌株的培养温度为23～37℃，培养时间为36～48小时，所加无菌水的体积为固体培养基的1.2～1.5倍。

7.根据权利要求1所述的一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法，其特征在于：
所述步骤b中，GHF1031菌种液和GHF1032菌种液的体积比为1：0.5～2，混合菌液的接种浓度为每100mL液体培养基接种1.5～2.5mL混合菌液，培养温度为20～28℃，培养时间为3～5天，摇床转速为100～180rpm。

8.根据权利要求1所述的一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法，其特征在于：
所述步骤c中，改性膨润土的添加量为每100mL发酵菌液添加7～12g，并按步骤b中培养条件继续培养1～2天。

9.根据权利要求1所述的一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法，其特征在于：
所述步骤d中，在3～7℃静置6～10小时，干燥温度为90～110℃，干燥时间1～2小时。

说明书

技术领域

[0001] 本发明涉及絮凝剂制备技术领域，尤其是涉及一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法。

背景技术

[0002] 絮凝剂是水处理技术中常用的药剂之一。近年来，应用最广泛的传统高分子聚合物类絮凝剂不断被发现存在威胁人类健康和破坏生态环境的潜在问题，研究环保无公害的新型絮凝剂便成为了水处理研究的热点问题，其中报道最多的当属微生物絮凝剂。生物絮凝剂是一类具有生物降解功能的聚合物，由具有这类特殊功能的微生物所分泌的包含多糖、脂类及蛋白质等。由于其对环境的安全及无污染性，因此受到国内外众多科研工作者的重视。目前已经从土壤、活性污泥、生活污水、各种工业废水等环境中筛选得到多种微生物絮凝剂产生菌，其中报道较多的有Nakamura等发现的产生微生物絮凝剂AJ7002的酱油曲霉AJ7002、Takagi等发现的产生PF101的拟青霉和Kurane等产生NOC-1的红平红球菌等，这些微生物絮凝剂相对于传统高分子化学絮凝剂来说具有环境友好、无二次污染的优点，但由于制取生物絮凝剂所需要的一些底物，如蔗糖、葡萄糖和果糖等成本过高，产量低，絮凝活性低等问题导致难于规模化应用及产业化，尚处于实验室研究阶段，离大规模推广应用还相差较大。以往研究者们都研究集中于分离高效的、具有制取絮凝剂功能的微生物，优化培养驯化条件及解析其絮凝机理和化学结构的研究。忽视了寻找新型廉价的替代原料作为制取生物絮凝剂的底物也是有效解决应用这一难题的有效途径之一。

发明内容

[0003] 为解决上述问题，本发明提供了一种利用速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032制得的复配菌剂及由其产生的胞外多糖制备具有吸附效率高、性能稳定、生产简单、成本低廉的絮凝剂的方法。

[0004] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

[0005] 本发明所用的速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031是从菲律宾蛤仔吐出的污泥中分离提纯获得，经实验发现该速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031的分泌物主要是具有重金属絮凝功能的胞外多糖。

[0006] 上述速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031已于2017年11月16日向中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心提交保藏，保藏地址：中国，北京，中国科学院微生物研究所，保藏编号CGMCC No.14920，建议的分类命名为Celeribacter baekdonensis；上述速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031的16S rDNA全序列(1290bp)已向美国国家生物技术信息中心(NCBI)的GenBank基因序列数据库提交，登陆号为KX702264，全序列如下：

[0007]

[0008] 上述白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032已于2017年11月16日向中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心提交保藏，保藏地址：中国，北京，中国科学院微生物研究所，保藏编号CGMCC No.14919，建议的分类命名为Albirhodobacter marinus；上述白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032的16S rDNA全序列(1268bp)已向美国国家生物技术信息中心(NCBI)的GenBank基因序列数据库提交，登陆号为KX702257，全序列如下：

[0009]

[0010]

[0011] 一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法，复配菌剂由速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032组成，包括以下步骤，

[0012] a)将速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032的菌种分别接种到固体培养基上，然后分别加入无菌水制成GHF1031菌种液和GHF1032菌种液；

[0013] b)将两种菌种液混合制得混合菌液，然后接种到液体培养基中发酵培养制得发酵菌液；

[0014] c)向发酵菌液中加入改性膨润土并继续发酵培养制得原料液；

[0015] d)将原料液静置沉降，然后分离沉降物，将沉降物干燥后制得絮凝剂。

[0016] 将速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032的菌种分别扩大培养后制成菌种液，将菌种液混合后经发酵培养制成发酵菌液，发酵菌液中含有丰富的胞外多糖，然后向发酵菌液中加入经改性处理的膨润土再继续发酵一段时间，利用改性膨润土表面表现为正电性的特点，将发酵菌液中的菌株和胞外多糖富集，这样可以优化后续胞外多糖的提取工艺，使胞外多糖提取不用经过操作复杂的醇提而能够直接富集获得吸附效率高、性能稳定、生产简单、成本低廉的絮凝剂的方法。

[0017] 步骤a固体培养基培养可以获得足够的菌种，满足菌种液的浓度要求；步骤b菌种液混合后发酵培养可以促进菌种充分分泌胞外多糖，提高胞外多糖的产率。

[0018] 作为优选，液体培养基由以下重量百分比的组分在50～60℃下混合配制而成，秸秆水解液200～260mL/L、尿素0.4～0.6g/L、硫酸铵0.1～0.3g/L、酵母膏0.4～0.6g/L、磷酸氢二钾3.8～4.0g/L、磷酸二氢钾1.5～2.5g/L、柠檬酸三钠0.5～1.5g/L、蛋白胨2～3g/L、硫酸铵0.2～0.3g/L，余量为陈化海水。

[0019] 作为优选，固体培养基为斜面培养基，其由在液体培养基中添加琼脂并凝固后制得，琼脂的添加量为液体培养基重量的1.5～2.0wt％。

[0020] 作为优选，秸秆水解液由以下方法制得，将新鲜的芦苇用水清洗2～3次，然后将其切成12～17cm长的小段并在100～110℃下干燥，干燥后将其粉碎至粒径为0.5～1cm，制得干燥芦苇颗粒，将干燥芦苇颗粒浸泡在其重量7～11倍的重量浓度为1.7wt％稀硫酸中，并在115～125℃下高温反应100～140分钟制得混合液，接着将混合液过滤制得秸秆水解液。

[0021] 秸秆水解液采用新鲜芦苇经酸化处理制得，其中含糖量较高，可以代替培养基中的葡萄糖，降低培养基的成本。

[0022] 作为优选，改性膨润土由以下方法制得，将膨润土与膨润土重量1.0～1.5倍重量的1.5mol/L草酸氢钾溶液混合后以1000～2000rpm转速下球磨1～1.5小时，静置1～2小时制得膨润土混合浆，将膨润土混合浆干燥并在300～400℃下处理40～60分钟冷却后粉碎制得改性膨润土。

[0023] 膨润土为层状硅酸盐结构，其层间具有丰富的可交换离子。上述处理主要是为了扩大膨润土的层间距并改善其表面电性；采用将膨润土和草酸氢钾溶液混合并球磨的方法进行，膨润土层间具有丰富的层间离子，这些层间离子具有较高的活性，将草酸氢钾与膨润土混合球磨后，膨润土能够被机械破碎，成为尺寸更小的颗粒并能够活化其层间离子的活性，这一过程中，草酸氢钾也能部分进入膨润土的层间，球磨之后的静置是为了使更多的草酸氢钾替换膨润土层间具有高活性的离子，也即使更多的草酸氢钾进入膨润土的层间并稳定存在，静置后高温处理，将膨润土层间的草酸氢钾除去，进而完成了膨润土层间距的扩大，同时也由此改善了膨润土的表面电性，使其表面成为正电性表面，进而能够在加入到发酵菌液后能够吸引具有负电性表面的菌种和胞外多糖，使菌种和胞外多糖能够富集，使得后续处理更将简便。

[0024] 膨润土选择800～1000目的膨润土。

[0025] 作为优选，步骤a中，速生杆菌菌株的培养温度为25～30℃，培养时间为36～48小时，所加无菌水的体积为固体培养基的1.2～1.5倍；白色红杆菌菌株的培养温度为23～37℃，培养时间为36～48小时，所加无菌水的体积为固体培养基的1.2～1.5倍。

[0026] 作为优选，步骤b中，GHF1031菌种液和GHF1032菌种液的体积比为1：0.5～2，混合菌液的接种浓度为每100mL液体培养基接种1.5～2.5mL混合菌液，培养温度为20～28℃，培养时间为3～5天，摇床转速为100～180rpm。

[0027] 作为优选，步骤c中，改性膨润土的添加量为每100mL发酵菌液添加7～12g，并按步骤b中培养条件继续培养1～2天。

[0028] 作为优选，步骤d中，在3～7℃静置6～10小时，干燥温度为90～110℃，干燥时间1～2小时。

[0029] 步骤d中，分离沉降物可以采用撇去上层液的方法实现，也可以采用过滤等方式分离沉降物。

[0030] 因此，本发明具有以下有益效果：通过本发明中的由速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032制得的复配菌剂及制备获得的絮凝剂具有高絮凝率的特点，同时其性能稳定、无毒副作用，安全性高，可以作为重金属废水絮凝剂使用。

实施方案

[0031] 下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步的说明。

[0032] 显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

[0033] 在本发明中，若非特指，所有的设备和原料均可从市场上购得或是本行业常用的，下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域常规方法。

[0034] 本发明中所指的陈化海水为取新鲜海水在23℃静置沉降7天后所得的海水的上清液。

[0035] 实施例1

[0036] 一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法，复配菌剂由速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032组成，包括以下步骤，

[0037] a)将速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032的菌种分别接种到固体培养基上，然后分别加入无菌水制成GHF1031菌种液和GHF1032菌种液；速生杆菌菌株的培养温度为25℃，培养时间为36小时，所加无菌水的体积为固体培养基的1.2倍；白色红杆菌菌株的培养温度为23℃，培养时间为36小时，所加无菌水的体积为固体培养基的1.2倍；

[0038] b)将两种菌种液混合制得混合菌液，然后接种到液体培养基中发酵培养制得发酵菌液；GHF1031菌种液和GHF1032菌种液的体积比为1：0.5，混合菌液的接种浓度为每100mL液体培养基接种1.5mL混合菌液，培养温度为20℃，培养时间为3天，摇床转速为100rpm；

[0039] c)向发酵菌液中加入改性膨润土并继续发酵培养制得原料液；改性膨润土的添加量为每100mL发酵菌液添加7g，并按步骤b中培养条件继续培养1天；

[0040] d)将原料液在3℃下静置沉降6小时，然后分离沉降物，将沉降物干燥后制得絮凝剂，燥温度为90℃，干燥时间1小时。

[0041] 其中，液体培养基由以下重量百分比的组分在50℃下混合配制而成，秸秆水解液200mL/L、尿素0.4g/L、硫酸铵0.1g/L、酵母膏0.4g/L、磷酸氢二钾3.8g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、柠檬酸三钠0.5g/L、蛋白胨2g/L、硫酸铵0.2g/L，余量为陈化海水；固体培养基为斜面培养基，其由在液体培养基中添加琼脂并凝固后制得，琼脂的添加量为液体培养基重量的
1.5wt％；秸秆水解液由以下方法制得，将新鲜的芦苇用水清洗2次，然后将其切成12cm长的小段并在100℃下干燥，干燥后将其粉碎至粒径为0.5cm，制得干燥芦苇颗粒，将干燥芦苇颗粒浸泡在其重量7倍的重量浓度为1.7wt％稀硫酸中，并在115℃下高温反应100分钟制得混合液，接着将混合液过滤制得秸秆水解液。

[0042] 改性膨润土由以下方法制得，将膨润土与膨润土重量1.0倍重量的1.5mol/L草酸氢钾溶液混合后以1000rpm转速下球磨1小时，静置1小时制得膨润土混合浆，将膨润土混合浆干燥并在300℃下处理40分钟冷却后粉碎制得改性膨润土。

[0043] 实施例2

[0044] 一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法，复配菌剂由速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032组成，包括以下步骤，

[0045] a)将速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032的菌种分别接种到固体培养基上，然后分别加入无菌水制成GHF1031菌种液和GHF1032菌种液；速生杆菌菌株的培养温度为27℃，培养时间为42小时，所加无菌水的体积为固体培养基的1.35倍；白色红杆菌菌株的培养温度为25℃，培养时间为
42小时，所加无菌水的体积为固体培养基的1.35倍；

[0046] b)将两种菌种液混合制得混合菌液，然后接种到液体培养基中发酵培养制得发酵菌液；GHF1031菌种液和GHF1032菌种液的体积比为1：1.25，混合菌液的接种浓度为每100mL液体培养基接种2.0mL混合菌液，培养温度为24℃，培养时间为4天，摇床转速为140rpm；

[0047] c)向发酵菌液中加入改性膨润土并继续发酵培养制得原料液；改性膨润土的添加量为每100mL发酵菌液添加9.5g，并按步骤b中培养条件继续培养1.5天；

[0048] d)将原料液在5℃下静置沉降8小时，然后分离沉降物，将沉降物干燥后制得絮凝剂，燥温度为100℃，干燥时间1.5小时。

[0049] 其中，液体培养基由以下重量百分比的组分在55℃下混合配制而成，秸秆水解液230mL/L、尿素0.5g/L、硫酸铵0.2g/L、酵母膏0.5g/L、磷酸氢二钾3.9g/L、磷酸二氢钾2.0g/L、柠檬酸三钠1.0g/L、蛋白胨2.5g/L、硫酸铵0.25g/L，余量为陈化海水；固体培养基为斜面培养基，其由在液体培养基中添加琼脂并凝固后制得，琼脂的添加量为液体培养基重量的
1.75wt％；秸秆水解液由以下方法制得，将新鲜的芦苇用水清洗2次，然后将其切成15cm长的小段并在105℃下干燥，干燥后将其粉碎至粒径为0.5～1cm，制得干燥芦苇颗粒，将干燥芦苇颗粒浸泡在其重量9倍的重量浓度为1.7wt％稀硫酸中，并在120℃下高温反应120分钟制得混合液，接着将混合液过滤制得秸秆水解液。

[0050] 改性膨润土由以下方法制得，将膨润土与膨润土重量1.25倍重量的1.5mol/L草酸氢钾溶液混合后以1500rpm转速下球磨1.25小时，静置1.5小时制得膨润土混合浆，将膨润土混合浆干燥并在350℃下处理50分钟冷却后粉碎制得改性膨润土。

[0051] 实施例3

[0052] 一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法，复配菌剂由速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032组成，包括以下步骤，

[0053] a)将速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031和白色红杆菌菌株Albirhodobacter sp.GHF1032的菌种分别接种到固体培养基上，然后分别加入无菌水制成GHF1031菌种液和GHF1032菌种液；速生杆菌菌株的培养温度为30℃，培养时间为48小时，所加无菌水的体积为固体培养基的1.5倍；白色红杆菌菌株的培养温度为37℃，培养时间为48小时，所加无菌水的体积为固体培养基的1.5倍；

[0054] b)将两种菌种液混合制得混合菌液，然后接种到液体培养基中发酵培养制得发酵菌液；GHF1031菌种液和GHF1032菌种液的体积比为1：2，混合菌液的接种浓度为每100mL液体培养基接种2.5mL混合菌液，培养温度为28℃，培养时间为5天，摇床转速为180rpm；

[0055] c)向发酵菌液中加入改性膨润土并继续发酵培养制得原料液；改性膨润土的添加量为每100mL发酵菌液添加12g，并按步骤b中培养条件继续培养2天；

[0056] d)将原料液在7℃下静置沉降10小时，然后分离沉降物，将沉降物干燥后制得絮凝剂，燥温度为110℃，干燥时间2小时。

[0057] 其中，液体培养基由以下重量百分比的组分在60℃下混合配制而成，秸秆水解液260mL/L、尿素0.6g/L、硫酸铵0.3g/L、酵母膏0.6g/L、磷酸氢二钾4.0g/L、磷酸二氢钾2.5g/L、柠檬酸三钠1.5g/L、蛋白胨3g/L、硫酸铵0.3g/L，余量为陈化海水；固体培养基为斜面培养基，其由在液体培养基中添加琼脂并凝固后制得，琼脂的添加量为液体培养基重量的
2.0wt％；秸秆水解液由以下方法制得，将新鲜的芦苇用水清洗3次，然后将其切成17cm长的小段并在110℃下干燥，干燥后将其粉碎至粒径为1cm，制得干燥芦苇颗粒，将干燥芦苇颗粒浸泡在其重量11倍的重量浓度为1.7wt％稀硫酸中，并在125℃下高温反应140分钟制得混合液，接着将混合液过滤制得秸秆水解液。

[0058] 改性膨润土由以下方法制得，将膨润土与膨润土重量1.5倍重量的1.5mol/L草酸氢钾溶液混合后以2000rpm转速下球磨1.5小时，静置2小时制得膨润土混合浆，将膨润土混合浆干燥并在400℃下处理60分钟冷却后粉碎制得改性膨润土。

[0059] 絮凝剂性能测定

[0060] 分别用蒸馏水配制4g/L的高岭土悬浊液与10g/L的氯化钙溶液，取100mL高岭土悬浊液与5mL氯化钙溶液混匀得到混合液，用3支10mL的比色管各盛取5mL的混合液，依次标记为管1、管2、管3，然后分别取实施例1、实施例2、实施例3中制备的絮凝剂0.3g各自对应加入管1、管2、管3中，300r/min下搅拌10分钟，再50r/min下搅拌2分钟，然后静置10分钟，在波长550nm处测量吸光度，对照样为配制混合液所用蒸馏水，根据吸光度计算絮凝率。其中絮凝率为测试样的吸光度值排除对照样的吸光度值后相对测试样的吸光度值的百分比，结果如表1所示。

[0061] 表1

[0062] 实施例实施例1 实施例2 实施例3絮凝率/％ 86.2 88.6 89.4

[0063] 絮凝剂的应用

[0064] 取对数期生长的小球藻的藻液100mL，加入由速生杆菌菌株Celeribacter sp.GHF1031制备的絮凝剂0.3g，在23℃下快速搅拌2～3分钟，搅拌速率150r/min，然后静置30分钟，小球藻的沉降率达到70％～77％，具体结果如表2所示。

[0065] 表2小球藻絮凝率

[0066]实施例实施例1 实施例2 实施例3
絮凝率/％ 71.5 74.5 76.6

[0067] 应当理解的是，对于本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

1用于脱色絮凝的复合菌剂及其絮凝剂的制备方法 2一种絮凝剂及其制备方法 3利用复合菌剂制备絮凝剂的方法 4一种利用复配菌剂制备絮凝剂的方法 5一种絮凝剂及其制备方法和应用 6一种利用复配菌剂制备高效絮凝剂的方法 7一种聚硅酸铝铁絮凝剂及制备方法 8一种聚磷氯化铁铝絮凝剂的制备方法 9一种缓释镍基催化絮凝剂的制备方法 10一种聚硅铁锰石墨烯絮凝剂的制备方法