[0023] 下面结合实施例，对本发明作进一步详细描述。
[0024] 以下实施例仅用于说明本发明，但不用以限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0025] 实施例1
[0026] 以腺苷为检测对象，用能识别腺苷的“裂开型”核酸适体为识别探针，利用落射式荧光显微镜成像，观测荧光斑的漂白情况，记录漂白步数，结合待测物浓度与荧光聚合度的关系，实现腺苷的高灵敏检测。
[0027] 具体步骤如下：
[0028] 1.用于检测腺苷的识别荧光探针的设计与选择，其核苷酸序列为：
[0029] Probe1为：5’-CY5 -ACC TGG GGG AGT AT-3’(见SEQ ID No.1)；
[0030] N-Probe2为：5’-CY5-TTT GCG GAG GAA GGT-TTT GCG GAG GAA GGT-TTT GCG GAG GAA GGT-TTT GCG GAG GAA GGT-TTT GCG GAG GAA GGT-TTT GCG GAG GAA GGT-TTT GCG GAG GAA GGT-TTT GCG GAG GAA GGT-3’(见SEQ ID No.2)。其中CY5为荧光染料。
[0031] 2.用硼酸缓冲液(pH＝8.0)将上述识别荧光探针Probe1与N-Probe2分别配制成8nM和1nM的溶液。
[0032] 3.将步骤(2)中的识别荧光探针Probe1与N-Probe2的溶液按体积1:1的比例混合，形成腺苷识别体系溶液。
[0033] 4.用4％盐酸配制成一系列浓度的腺苷溶液，分别为1nM、2nM、3nM、4nM、5nM、6nM、7nM、8nM。
[0034] 5.将配制的一系列浓度的腺苷溶液分别与腺苷识别体系溶液混合，静置反应。
[0035] 6.取步骤(5)中混合溶液4μL滴加到载玻片上，盖上盖玻片，用指甲油涂抹盖玻片四周，以免水分蒸发，送显微镜观察。
[0036] 7.记录不同浓度的腺苷溶液中腺苷识别体系的荧光染料团聚情况。考察各荧光斑点的漂白步数，作标准曲线。非线性拟合后，所得关系式为y＝P1/(P1-x)，P1＝9.28284±0.02023，R^2＝0.9975。将数据转换为直线为1/y＝-0.10058x+0.94387。其检测限为4pM。
(如图3)
[0037] 8.取另外几种已知浓度的腺苷溶液，考察该法的加标回收率，见下表1，较高的加标回收率说明本方法可行性强，结果可靠，能用来检测实际的水样、尿样或血清等。
[0038] 表1加标回收率考察数据
[0039]
[0040] 实施例2
[0041] 以可卡因为检测对象，用能识别可卡因的“裂开型”核酸适体为识别探针，利用全内反射荧光显微镜成像，观测荧光斑的漂白情况，记录漂白步数，结合待测物浓度与荧光聚合度的关系，实现可卡因的高灵敏检测。
[0042] 具体步骤如下：
[0043] 1.用于检测可卡因的荧光探针的设计与选择，其核苷酸序列为：
[0044] Probe1为：5’-CY3- ACAGC AGGGT GAAGT AACTT CTTG-3’(见SEQ ID No.3)；
[0045] N-Probe2为：5’-CY3- CAAGA ACTGA GGG- CAAGA ACTGA GGG- CAAGA ACTGA GGG- CAAGA ACTGA GGG- CAAGA ACTGA GGG- CAAGA ACTGA GGG- CAAGA ACTGA GGG-CAAGA ACTGA GGG- CAAGA ACTGA GGG- CAAGA ACTGA GGG-3’(见SEQ ID No.4)；其中，CY3为荧光染料。
[0046] 2.用Tris-HCl缓冲液(pH＝8.2)将上述识别荧光探针Probe1与N-Probe2分别配制成10nM和1nM的溶液。
[0047] 3.将(2)中所述识别荧光探针Probe1与N-Probe2的溶液按体积1:1的比例混合，形成腺苷识别体系溶液。
[0048] 4.用4％盐酸配制一系列浓度的可卡因溶液，分别为1nM、2nM、3nM、4nM、5nM、6nM、7nM、8nM、9nM、10nM。
[0049] 5.将配制的一系列浓度的可卡因溶液，分别与可卡因识别体系溶液混合，静置反应。
[0050] 6.取(5)中混合溶液4μL滴加到载玻片上，盖上盖玻片，用指甲油涂抹盖玻片四周，以免水分蒸发，送显微镜观察。
[0051] 7.记录不同浓度的可卡因溶液中，可卡因识别体系的团聚情况。考察各荧光斑点的漂白步数，作标准曲线。
[0052] 8.取另外几种已知浓度的可卡因溶液，考察该法的加标回收率，结果显示了较高的加标回收率，说明本方法可行性强，结果可靠，能用来检测实际的水样、尿样或血清等。
[0053] 实施例3
[0054] 以β-雌二醇为检测对象，用能识别β-雌二醇的“裂开型”核酸适体为识别探针，利用全内反射荧光显微镜成像，观测荧光斑的漂白情况，记录漂白步数，结合待测物浓度与荧光聚合度的关系，实现β-雌二醇的高灵敏检测。
[0055] 具体步骤如下：
[0056] 1.用于检测β-雌二醇的荧光探针的设计与选择，其核苷酸序列为：
[0057] Probe1为：5’-Alexa 594- GCGGC TCTGC GCATT CAATT GCTGC GCGCT GAAGC GCGGA AGC–3’(见SEQ ID No.5)；
[0058] N-Probe2为：5’-Alexa 594-GCTTC CAGCT TATTG AATTA CACGC AGAGG GTA-GCTTC CAGCT TATTG AATTA CACGC AGAGG GTA- GCTTC CAGCT TATTG AATTA CACGC AGAGG GTA- GCTTC CAGCT TATTG AATTA CACGC AGAGG GTA-GCTTC CAGCT TATTG AATTA CACGC AGAGG GTA-GCTTC CAGCT TATTG AATTA CACGC AGAGG GTA-GCTTC CAGCT TATTG AATTA CACGC AGAGG GTA-GCTTC CAGCT TATTG AATTA CACGC AGAGG GTA--3’(见SEQ ID No.6)。其中Alexa 594为荧光染料。
[0059] 其它步骤与实施例1相同。
[0060] 本实施例中加标回收率考察数据显示了较高的加标回收率，说明本方法可行性强，结果可靠，能用来检测实际的水样、尿样或血清等。
