[0019] 以下结合具体实施例,对本发明作进一步说明。应理解,以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
[0020] 实施例1
[0021] 一、实验材料
[0022] 1,6-己二醇,供应商Sigma;
[0023] RPMI培养基,英文名RPMI Medium Modified,供应商HyClone;
[0024] PBS(1×),供应商HyClone;
[0025] 青霉素-链霉素溶液,英文名Penicillin-Streptomycin Solution,供应商HyClone;
[0026] 胎牛血清,供应商杭州四季青生物工程材料有限公司;
[0027] CCK-8,英文名Cell Counting Kit-8,供应商Dojindo Laboratories;
[0028] PI,英文名Propidium Iodide,供应商Sigma。
[0029] 二、实验方法
[0030] 1、1,6-己二醇溶液、PI染色液配置
[0031] 1,6-己二醇粉末溶解于无菌水中,储存浓度为1g/mL,至于4℃避光保存;
[0032] PI用PBS溶解,储存浓度为10mg/mL,至于4℃避光保存。
[0033] 2、细胞培养
[0034] 弥漫型大B细胞淋巴瘤细胞HBL-1、SUDHL-2,骨髓瘤细胞U266,和霍奇金淋巴瘤细胞Raji(供应商上海钰博生物科技有限公司)培养在含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的RPMI中,每2~3天进行一次传代。
[0035] 3、CCK-8检测
[0036] 将HBL-1、SUDHL-2、U266和Raji细胞分别种于96孔板,分为空白组、实验组和单纯培养基组。空白组为不加1,6-己二醇处理的细胞。单纯培养基组为不含1,6-己二醇且不含细胞的培养基。实验组为用不同浓度1,6-己二醇处理的细胞,处理浓度分别为2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL和20mg/mL。空白组、单纯培养基组和实验组的每个浓度均设置3个复孔,处理48h。每孔加入10uL的CCK-8溶液,在细胞培养箱中孵育1~2h。利用Tecan M200酶标仪,选择
450nm波长,检测各孔光吸收值,计算相对细胞数,结果如图1所示,1,6-己二醇在5mg/mL和
10mg/mL的浓度就能显著抑制弥漫型大B细胞淋巴瘤细胞HBL-1、SUDHL-2,骨髓瘤细胞U226增殖,但对霍奇金淋巴瘤细胞Raji的抑制效果较弱。
[0037] 4、PI染色检测
[0038] 将HBL-1、SUDHL-2、U266和Raji细胞分别种于96孔板,分为空白组和实验组。空白组为不加1,6-己二醇的细胞,实验组为用1,6-己二醇处理的细胞,处理浓度为5mg/mL和10mg/mL。每组设置3个复孔,处理48h。用10ug/mL的PI给各组细胞染色10min,用荧光显微镜拍照。结果如图2所示,1,6-己二醇在5mg/mL和10mg/mL的浓度能显著诱导弥漫型大B细胞淋巴瘤和骨髓瘤细胞凋亡(PI染色阳性),但对霍奇金淋巴瘤细胞没有明显影响。
[0039] 三、实验结果
[0040] 为了研究1,6-己二醇是否对血液肿瘤细胞有更强的杀伤效果,上述实验选取了弥漫型大B细胞淋巴瘤细胞HBL-1、SUDHL-2,骨髓瘤细胞U266增殖,以及霍奇金淋巴瘤细胞Raji共4种血液肿瘤细胞,分别用0、2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL和20mg/mL的1,6-己二醇处理细胞48小时,CCK-8检测以及PI染色的结果显示,1,6-己二醇在低浓度条件下能显著抑制弥漫型大B细胞淋巴瘤细胞HBL-1、SUDHL-2和骨髓瘤细胞U226增殖,并能显著诱导它们凋亡;但在这种低浓度情况下,1,6-己二醇对霍奇金淋巴瘤细胞Raji的抑制效果较弱。这表明,1,
6-己二醇能相对特异地抑制部分血液肿瘤细胞增值。在临床上,如果我们能很好地控制1,
6-己二醇浓度,可能有比较好的治疗部分血液肿瘤的潜力,特别是对于弥漫型大B细胞淋巴瘤和骨髓瘤。
[0041] 以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明,但本发明创造并不限于所述实施例,熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换,这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。