[0014] 下面结合具体试验和实施例对本发明的技术方案作进一步说明,本发明试验和实施例中涉及的百分比均为质量百分比。
[0015] 实施例1 吩嗪-1-甲酰胺改造化合物15-1的制备
[0016] 合成的具体过程:将吩嗪-1-甲酰胺在酸性条件下水解生成吩嗪-1-羧酸;取20mmol吩嗪-1-羧酸(0.4577g)和200ml亚硫酰氯加入到500ml圆底烧瓶中,安装回流反应装置(使用无水氯化钙干燥管),磁力搅拌,回流反应6h,反应液冷却后旋蒸移除亚硫酰氯,获得中间产物吩嗪-1-甲酰氯,不需纯化直接用于下一步反应;将获得的吩嗪-1-甲酰氯溶于
200ml干燥二氯甲烷(DCM),加入到500ml干燥圆底烧瓶中,氮气保护,磁力搅拌,置于冰水浴中冷却,0℃条件下先后加入11.15ml三乙胺(80mmol,4equiv.)和2.367g 3-甲氧基-1-丙胺(20mmol,1equiv.),加料完毕后撤除冰水浴,室温条件下反应14h,间歇取样,TLC监测反应,旋蒸移除DCM后萃取三次,每次使用450ml液体(乙酸乙酯与H2O按2:1的体积比混合)萃取,合并有机相,使用无水硫酸钠干燥12h,过滤,使用EA洗涤固体硫酸钠,旋蒸,得改造化合物产品15-1,1.4833g,产率22.93%。
[0017] 实施例2 改造化合物15-1的结构鉴定
[0018] 采用核磁共振氢谱(1H NMR),核磁共振碳谱(13C NMR)技术对获得的改造化合物15-1进行测定。经氢谱(1H NMR(500MHz,CDCl3)δ11.03(s,12H),9.25–8.90(m,59H),8.90–
7.86(m,427H),8.11–7.73(m,224H),8.11–7.73(m,223H),7.82(dd,J=16.5,10.4Hz,19H),
7.29(s,16H),7.10–6.85(m,6H),5.86–5.75(m,8H),5.33–5.23(m,9H),4.82(t,J=9.7Hz,
9H),4.89–4.39(m,14H),4.89–4.24(m,19H),4.89–4.18(m,23H),4.89–4.07(m,29H),4.89–
4.02(m,32H),4.89–3.71(m,81H),3.68(d,J=20.8Hz,17H),3.71–3.51(m,22H),3.71–3.30(m,38H),3.71–3.26(m,43H),3.71–3.20(m,53H),3.71–3.03(m,80H),3.71–3.05(m,80H),
3.71–2.93(m,83H),3.71–2.88(m,84H),3.71–2.81(m,85H),3.71–2.45(m,128H),3.71–
2.41(m,133H),3.71–2.27(m,150H),3.71–2.17(m,155H),3.71–2.12(m,159H),3.71–2.07(m,169H),3.71–2.01(m,175H),3.71–1.70(m,258H),3.71–1.62(m,273H),3.71–1.54(m,
292H),3.71–1.40(m,351H),1.24(dd,J=37.1,31.7Hz,182H),1.04(t,J=6.9Hz,19H),
0.92(dd,J=41.2,7.3Hz,48H),0.18–-0.07(m,161H).)、碳谱(13C NMR(126MHz,CDCl3)δ
165.89(s),143.98(s),143.26(s),142.68(s),139.95(s),139.75(s),137.35(s),135.44(s),135.02(s),133.48(s),133.17(s),131.73(d,J=9.5Hz),131.12(s),130.58(s),
130.32–129.88(m),129.80–129.54(m),129.45(s),128.99(s),127.89(s),124.85(s),
77.26(s),77.00(s),76.75(s),46.33(s),39.50(s),39.14(s),33.58(s),28.91(s),22.52(s),14.00(s),0.96(s).)结合质谱(分子量:323.20,图1)检测合成的化合物与预期目标吻合,其分子式为C18H17N3O3,结构式如下:
[0019]
[0020] 实施例3 改造化合物15-1对草莓灰霉病菌的抑制作用
[0021] ⑴仪器及相关材料
[0022] YJ-VS-2型超净工作台(无锡一净净化设备有限公司),LDZX-30E灭菌锅(上海申安医疗器械厂),MPJ-250型培养箱(上海森信实验仪器有限公司),QHX-400B-III型光照培养箱(上海新苗医疗器械制造有限公司),电炉(北京中兴伟业仪器有限公司)等以及量筒、玻璃棒、烧杯、三角瓶、直尺、铅笔、标签纸、封口膜、挑针、容量瓶、接种针、ph-101喷壶、打孔器、培养皿、菜刀、纱布。
[0023] ⑵药剂
[0024] 实施例1制备得到的93%吩嗪-1-甲酰胺改造物15-1原药(以下简称改造物15-1);琼脂、葡萄糖、丙酮和吐温80等药剂均从国药集团购买。
[0025] ⑶菌株
[0026] 试验用野生敏感型的油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)由湖南农业大学植物病理实验室分离、鉴定和保存。
[0027] ⑷改造物15-1对油菜菌核病菌的活性测定方法
[0028] 采用生长速率法测定改造物15-1对油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)的抑菌作用。取适量丙酮将改造物15-1原药溶解后配制成质量浓度为1000μg/mL的母液,按药液与培养基1:9的体积比配制成最终含药量为2.5、5、10、20、40μg/mL的含药平板,用直径5mm的打孔器在预培养2d的油菜菌核病菌菌落边缘打取菌饼正面朝下接种到含药平板上,每处理重复3次,以无药平板作空白对照,置于26-28℃培养箱中,待对照菌落直径长至整个培养的2/3时,采用十字交叉法测量各处理的菌落直径。同时,采用同样的方法测试吩嗪-1-甲酰胺对油菜菌核病菌的抑制作用。计算抑制率,EC50值,相关系数及回归方程。
[0029] ⑸结果与分析
[0030] 由表1可知,改造物15-1浓度越高,抑菌效果越好。当改造物15-1浓度为40μg/mL时,抑菌效果最好,其抑制率为94.68%;改造物15-1浓度为20μg/mL时,抑菌效果次之;其他处理的抑制率低于90%。该药剂对油菜菌核病菌具有较强毒力效果(EC50为0.37μg/mL,回归方程为Y=0.7857x+5.3393,相关系数为0.9890),其毒力强于对照药剂吩嗪-1-甲酰胺(EC50为14.31μg/mL,回归方程为Y=1.2266x+3.6858,相关系数为0.9132),抑制率明显高于对照药剂吩嗪-1-甲酰胺(见表2),说明改造物15-1可作为防控油菜菌核病新农药的先导化合物。
[0031] 表1吩嗪-1-甲酰胺改造物15-1对油菜菌核病菌的抑制作用
[0032]
[0033] 表2吩嗪-1-甲酰胺(对照药剂)对油菜菌核病菌的抑制作用
[0034]