[0022] 为了便于对本发明的进一步理解,下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则,本发明的实施方式不限于以下内容。
[0023] 实施例1
[0024] 取200mL蒸馏水,加入0.2mmol C70富勒烯,0.4mmol七水合硫酸亚铁,0.8mmol无水氯化铁,通入氮气搅拌15分钟后,加热至回流温度,保持回流20-30分钟后,降温至85-90℃,维持该温度(85-90℃)滴加氨水(6mL),继续搅拌反应1-1.5h,反应液呈黑色浑浊状态,自然降至室温,静置0.5h后,用磁铁吸附分离,得到黑色固体;用蒸馏水洗3-5次后,于60℃真空干燥12h 得到黑色固体粉末,即为磁性C70富勒烯纳米材料(简写为C70-Fe3O4,图1,以下简称产品A);本实施例中使用的蒸馏水为经过超声后的蒸馏水。
[0025] 实施例2
[0026] 取100mL蒸馏水,加入0.1mmol C70富勒烯,0.2mmol七水合硫酸亚铁,0.4mmol无水氯化铁,通入氩气搅拌20分钟后,加热至回流温度,保持回流20-30分钟后,降温至85-90℃,维持该温度(85-90℃)滴加氨水(5mL),继续搅拌反应1-1.5h,反应液呈黑色浑浊状态,自然降至室温,静置0.5h后,用磁铁吸附分离,得到黑色固体;用蒸馏水洗3-5次后,于60℃真空干燥24h 得到黑色固体粉末,即为磁性C70富勒烯纳米材料(简写为C70-Fe3O4,SEM图与图1一致,以下简称产品B);本实施例中使用的蒸馏水为经过超声后的蒸馏水。
[0027] 实施例3
[0028] 取200mL蒸馏水,加入0.2mmol石墨烯,0.4mmol七水合硫酸亚铁, 0.8mmol无水氯化铁,通入氮气搅拌15分钟后,加热至回流温度,保持回流20-30分钟后,降温至85-90℃,维持该温度(85-90℃)滴加氨水(6mL),继续搅拌反应1-1.5h,反应液呈黑色浑浊状态,自然降至室温,静置0.5h后,用磁铁吸附分离,得到黑色固体;用蒸馏水洗3-5次后,于60℃真空干燥12h 得到黑色固体粉末,即为磁性石墨烯材料(以下简称产品C);本实施例中使用的蒸馏水为经过超声后的蒸馏水。
[0029] 实施例4
[0030] 取200mL蒸馏水,加入0.4mmol七水合硫酸亚铁,0.8mmol无水氯化铁,通入氮气搅拌15分钟后,加热至回流温度,保持回流20-30分钟后,降温至85-90℃,维持该温度(85-90℃)滴加氨水(6mL),继续搅拌反应1-1.5 h,反应液呈黑色浑浊状态,自然降至室温,静置0.5h后,用磁铁吸附分离,得到黑色固体;用蒸馏水洗3-5次后,于60℃真空干燥12h得到黑色固体粉末,即为磁性Fe3O4材料(以下简称产品D);本实施例中使用的蒸馏水为经过超声后的蒸馏水。
[0031] 实施例5
[0032] 取200mL蒸馏水,加入0.4mmol C70富勒烯,0.4mmol七水合硫酸亚铁,0.8mmol无水氯化铁,通入氮气搅拌15分钟后,加热至回流温度,保持回流20-30分钟后,降温至85-90℃,维持该温度(85-90℃)滴加氨水(6mL),继续搅拌反应1-1.5h,反应液呈黑色浑浊状态,自然降至室温,静置0.5h后,用磁铁吸附分离,得到黑色固体;用蒸馏水洗3-5次后,于60℃真空干燥12h 得到黑色固体粉末,即为磁性C70富勒烯纳米材料(以下简称产品E);本实施例中使用的蒸馏水为经过超声后的蒸馏水。
[0033] 实施例6
[0034] 取200mL蒸馏水,加入0.1mmol C70富勒烯,0.4mmol七水合硫酸亚铁,0.8mmol无水氯化铁,通入氮气搅拌15分钟后,加热至回流温度,保持回流20-30分钟后,降温至85-90℃,维持该温度(85-90℃)滴加氨水(6mL),继续搅拌反应1-1.5h,反应液呈黑色浑浊状态,自然降至室温,静置0.5h后,用磁铁吸附分离,得到黑色固体;用蒸馏水洗3-5次后,于60℃真空干燥12h 得到黑色固体粉末,即为磁性C70富勒烯纳米材料(以下简称产品F);本实施例中使用的蒸馏水为经过超声后的蒸馏水。
[0035] 实施例7标准工作曲线的绘制
[0036] 试剂
[0037] 安奈格列汀标准品(含量>99.7%)和药片(规格:100mg/片)由江苏联环药业股份有限公司提供;甲醇、乙醇、氨水、三水合乙酸钠、冰醋酸购买于国药集团。实验中所有水为高纯水,试剂均为分析纯。
[0038] 安奈格列汀标准溶液(0.10mg/mL):用分析天平准确称取0.010g安奈格列汀标准品,用蒸馏水溶解定容至100mL,置于凉暗处保存。
[0039] pH 3.0缓冲溶液:称取0.80g三水合乙酸钠,用水溶解,加入5.4mL冰醋酸,用水稀释到500mL,于酸度计上调节pH为3.0。
[0040] 仪器
[0041] SHIMADZU UV-1780分光光度计(UV-VIS spectrophotometer)(岛津仪器苏州有限公司),离心机TDL80-2B(上海安亭科学仪器厂);数显恒温水浴锅(国华电器有限公司);真空干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);DGG-9030B型电热恒温鼓风干燥箱(上海森信实验仪器有限公司);pH S-25型pH计(上海精科雷磁);五方KQ-50E超声波清洗器。
[0042] 样品制备
[0043] 安奈格列汀药片样的制备:取安奈格列汀药片研磨成粉末,准确称重相当于 1片药物的粉末,加入到100mL容量瓶中,加入50mL蒸馏水超声溶解,使得药片全部溶解后均匀分散成浑浊液,然后用蒸馏水定容至100mL,用0.45μm滤膜过滤,取滤液于一干燥洁净烧杯中,用移液管量取5mL滤液于另一50mL容量瓶中,用蒸馏水定容后振荡摇匀。
[0044] 人血清样的制备:取健康自愿者的血清,加入适量安奈格列汀标准溶液后,按1:4的比例加入甲醇去除血清中的蛋白,4000r/min离心分离15min,取上清液分析。
[0045] 标准工作曲线的绘制
[0046] 以吸光度数值对相应的安奈格列汀浓度绘制曲线(图2),所测定的分析性能参数结果见表1。由表1可知,线性范围为0.10-2.5μg/mL,检测限为0.0926 μg/mL。
[0047] 表1分析方法的线性参数和检测限
[0048]
[0049] 实施例8
[0050] 例1
[0051] (1)萃取:在10.0mL离心管中,分别加入1.0mL pH 3.0醋酸-醋酸钠 (HAc-NaAc)缓冲溶液、20μL安奈格列汀标准溶液(0.10mg/mL)、10mg实施例1制备的产品A,用蒸馏水稀释至10mL,摇匀,在室温下振荡10-15min,静置后,用磁铁吸附分离萃取吸附剂C70-Fe3O4,待上层溶液澄清透明后,取上清液用紫外可见分光光度计检测,检测结果低于工作曲线的检测下限,即安奈格列汀几乎全被C70-Fe3O4吸附。
[0052] (2)洗脱:将步骤(1)用磁铁吸附分离得到的萃取吸附剂C70-Fe3O4置于 5mL离心管中,加入无水乙醇,定容,摇匀,在室温下,振荡20-30min,静置后,用磁铁吸附分离使C70-Fe3O4沉降,待上层溶液澄清透明后,取上清液用紫外可见分光光度计检测,检测结果换算为0.3931μg/mL(理论值为0.40μg/mL)。
[0053] 例2
[0054] (1)萃取:在10.0mL离心管中,分别加入1.0mL pH 3.0醋酸-醋酸钠 (HAc-NaAc)缓冲溶液、20μL安奈格列汀标准溶液(0.10mg/mL)、20mg实施例2制备的产品B,用蒸馏水稀释至10mL,摇匀,在室温下振荡10-15min,静置后,用磁铁吸附分离萃取吸附剂C70-Fe3O4,待上层溶液澄清透明后,取上清液用紫外可见分光光度计检测,检测结果低于工作曲线的检测下限,即安奈格列汀几乎全被C70-Fe3O4吸附。
[0055] (2)洗脱:将步骤(1)用磁铁吸附分离得到的萃取吸附剂C70-Fe3O4置于 5mL离心管中,加入无水乙醇,定容,摇匀,在室温下,振荡20-30min,静置后,用磁铁吸附分离使C70-Fe3O4沉降,待上层溶液澄清透明后,取上清液用紫外可见分光光度计检测,检测结果换算为0.3929μg/mL(理论值为0.40μg/mL)。
[0056] 例3
[0057] 萃取:在10.0mL离心管中,分别加入1.0mL pH 3.0醋酸-醋酸钠(HAc-NaAc) 缓冲溶液、20μL安奈格列汀标准溶液(0.10mg/mL)、10mg实施例3制备的产品C,用蒸馏水稀释至10mL,摇匀,在室温下振荡10-15min,静置后,用磁铁吸附分离萃取吸附剂,待上层溶液澄清透明后,取上清液用紫外可见分光光度计检测,检测结果换算为0.1654μg/mL,说明产品C对安奈格列汀的吸附效果一般,不适合用于安奈格列汀药物检测中的固相萃取吸附剂。
[0058] 例4
[0059] 萃取:在10.0mL离心管中,分别加入1.0mL pH 3.0醋酸-醋酸钠(HAc-NaAc) 缓冲溶液、20μL安奈格列汀标准溶液(0.10mg/mL)、10mg实施例4制备的产品D,用蒸馏水稀释至10mL,摇匀,在室温下振荡10-15min,静置后,用磁铁吸附分离萃取吸附剂,待上层溶液澄清透明后,取上清液用紫外可见分光光度计检测,检测结果换算为0.2218μg/mL,说明产品D对安奈格列汀的吸附效果一般,不适合用于安奈格列汀药物检测中的固相萃取吸附剂。
[0060] 例5
[0061] (1)萃取:在10.0mL离心管中,分别加入1.0mL pH 3.0醋酸-醋酸钠 (HAc-NaAc)缓冲溶液、20μL安奈格列汀标准溶液(0.10mg/mL)、10mg实施例5制备的产品E,用蒸馏水稀释至10mL,摇匀,在室温下振荡10-15min,静置后,用磁铁吸附分离萃取吸附剂C70-Fe3O4,待上层溶液澄清透明后,取上清液用紫外可见分光光度计检测,检测结果低于工作曲线的检测下限,即安奈格列汀几乎全被C70-Fe3O4吸附。
[0062] (2)洗脱:将步骤(1)用磁铁吸附分离得到的萃取吸附剂C70-Fe3O4置于 5mL容量瓶中,加入无水乙醇,定容,摇匀,在室温下,振荡20-30min,静置后,用磁铁吸附分离使C70-Fe3O4沉降,待上层溶液澄清透明后,取上清液用紫外可见分光光度计检测,检测结果换算为0.3288μg/mL(理论值为0.40μg/mL)。说明产品E吸附效果较好,但其洗脱解吸附效果不理想,不适合用于安奈格列汀药物检测中的固相萃取吸附剂。
[0063] 例6
[0064] (1)萃取:在10.0mL离心管中,分别加入1.0mL pH 3.0醋酸-醋酸钠 (HAc-NaAc)缓冲溶液、20μL安奈格列汀标准溶液(0.10mg/mL)、10mg实施例6制备的产品F,用蒸馏水稀释至10mL,摇匀,在室温下振荡10-15min,静置后,用磁铁吸附分离萃取吸附剂C70-Fe3O4,待上层溶液澄清透明后,取上清液用紫外可见分光光度计检测,检测结果换算为0.1258μg/mL,说明产品F 对安奈格列汀的吸附效果不理想,不适合用于安奈格列汀药物检测中的固相萃取吸附剂。
[0065] 实施例9
[0066] 本发明利用实施例7制作的安奈格列汀浓度与吸光度的标准工作曲线,利用紫外可见分光光度计检测样品中安奈格列汀浓度的精密度与重现性、准确度与回收率的考察。
[0067] 精密度与重现性
[0068] 分别配制浓度为0.40、0.80μg/mL两种浓度的安奈格列汀标准溶液,日内精密度是同一天对同一浓度的样品连续分析5次,计算精密度,结果显示RSD为 0.07%~0.21%,表示方法的重现性较好,该方法可用于日常分析。
[0069] 在本实验中,用工作曲线法对安奈格列汀药片进行了测定,结果为101.5mg/ 片,与标示量100mg/片无显著性差异。
[0070] 准确度与回收率
[0071] 本实验中利用加标实验的方法测定回收率,并评价了方法的准确度。相对回收率计算如下:
[0072]
[0073] 式中Creal、Cadded、Cfound分别是实际样品中测定出的安奈格列汀浓度、加入到样品中安奈格列汀标准溶液浓度、加了标准品后测定出的样品中安奈格列汀浓度。实验测定结果如表2所示。药品中回收率为96.8%~102.3%,人血清中回收率为96.8%~100.9%,说明方法的准确性较好,可用于药品中安奈格列汀含量的测定。
[0074] 表2回收率实验
[0075]
[0076] 可见,本发明利用紫外可见分光光度计检测样品中安奈格列汀浓度的方法,精密度高、重现性好,实施例8中检测结果可信。