[0022] 下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0023] 需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0024] 实施例1：
[0025] 一种三叶青藤的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
[0026] 1)繁殖复壮一体化培养：以三叶青藤的带芽茎段为外植体，接种于繁殖复壮一体化培养基，置于培养室内培养15d，培养室温度22-26℃，光照强度1400lux，光照时间8h/d，然后转入培养温度25-28℃，光照强度3500lux的自然光照条件下继续培养15d，获得健壮的丛生芽，繁殖复壮一体化培养基的配方为：MS+1.0mg/L BA+0.3mg/L LFS+0.1mg/L IBA+0.1mg/L NAA；
[0027] 2)生根炼苗同步化培养：步骤1)培养得到的丛生芽接种到生根炼苗同步化培养基中，于室内培养温度22-26℃，光照强度1500lux，光照时间为10h/d的条件下培养7d，再转入大棚内培养温度为23-28℃、相对湿度为60-80％的自然光下培养25d获得适宜移栽的完整植株，其中大棚上部覆盖遮阳网，遮光度为20％，其中，生根炼苗同步化培养基的配方为：1/2MS+0.1mg/L IBA+1.0mg/L NAA+0.5mg/L IAA+0.3mg/L MET；
[0028] 3)移栽：将步骤2)获得的完整植株从生根炼苗同步化培养基中取出，洗净根部残留培养基，移栽至育苗床或育苗大棚，移栽的环境相对湿度为80-90％，培养温度25-28℃，遮光度为60％。
[0029] 其中，所述的三叶青藤的组织培养快速繁殖方法，步骤1)中所述外植体的接种方法为：将所述外植体平铺在繁殖复壮一体化培养基的表面，并将1/2所述外植体压入繁殖复壮一体化培养基内。
[0030] 其中，MS为MS基本培养基，BA为6-苄基腺嘌呤，LFS为灵发素，IBA为吲哚丁酸，NAA为萘乙酸，IAA为吲哚乙酸，MET为多效唑。
[0031] 实施例2：
[0032] 一种三叶青藤的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
[0033] 1)繁殖复壮一体化培养：以三叶青藤的带芽茎段为外植体，接种于繁殖复壮一体化培养基，置于培养室内培养15d，培养室温度22-26℃，光照强度1400lux，光照时间8h/d，然后转入培养温度25-28℃，光照强度4500lux的自然光照条件下继续培养15d，获得健壮的丛生芽，繁殖复壮一体化培养基的配方为：MS+2.0mg/L BA+0.5mg/L LFS+0.3mg/L IBA+1.0mg/L NAA；
[0034] 2)生根炼苗同步化培养：步骤1)培养得到的丛生芽接种到生根炼苗同步化培养基中，于室内培养温度22-26℃，光照强度1500lux，光照时间为10h/d的条件下培养7d，再转入大棚内培养温度为23-28℃、相对湿度为60-80％的自然光下培养25d获得适宜移栽的完整植株，其中大棚上部覆盖遮阳网，遮光度为40％，其中，生根炼苗同步化培养基的配方为：1/2MS+0.3mg/L IBA+2.0mg/L NAA+1.5mg/L IAA+0.5mg/L MET；
[0035] 3)移栽：将步骤2)获得的完整植株从生根炼苗同步化培养基中取出，洗净根部残留培养基，移栽至育苗床或育苗大棚，移栽的环境相对湿度为80-90％，培养温度25-28℃，遮光度为75％。
[0036] 其中，所述的三叶青藤的组织培养快速繁殖方法，步骤1)中所述外植体的接种方法为：将所述外植体平铺在繁殖复壮一体化培养基的表面，并将1/2所述外植体压入繁殖复壮一体化培养基内。
[0037] 其中，MS为MS基本培养基，BA为6-苄基腺嘌呤，LFS为灵发素，IBA为吲哚丁酸，NAA为萘乙酸，IAA为吲哚乙酸，MET为多效唑。
[0038] 实施例3：
[0039] 一种三叶青藤的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
[0040] 1)繁殖复壮一体化培养：以三叶青藤的带芽茎段为外植体，接种于繁殖复壮一体化培养基，置于培养室内培养15d，培养室温度22-26℃，光照强度1400lux，光照时间8h/d，然后转入培养温度25-28℃，光照强度4000lux的自然光照条件下继续培养15d，获得健壮的丛生芽，繁殖复壮一体化培养基的配方为：MS+1.5mg/L BA+0.4mg/L LFS+0.2mg/L IBA+0.5mg/L NAA；
[0041] 2)生根炼苗同步化培养：步骤1)培养得到的丛生芽接种到生根炼苗同步化培养基中，于室内培养温度22-26℃，光照强度1500lux，光照时间为10h/d的条件下培养7d，再转入大棚内培养温度为23-28℃、相对湿度为60-80％的自然光下培养25d获得适宜移栽的完整植株，其中大棚上部覆盖遮阳网，遮光度为30％，其中，生根炼苗同步化培养基的配方为：1/2MS+0.2mg/L IBA+1.5mg/L NAA+1.0mg/L IAA+0.4mg/L MET；
[0042] 3)移栽：将步骤2)获得的完整植株从生根炼苗同步化培养基中取出，洗净根部残留培养基，移栽至育苗床或育苗大棚，移栽的环境相对湿度为80-90％，培养温度25-28℃，遮光度为65％。
[0043] 其中，所述的三叶青藤的组织培养快速繁殖方法，步骤1)中所述外植体的接种方法为：将所述外植体平铺在繁殖复壮一体化培养基的表面，并将1/2所述外植体压入繁殖复壮一体化培养基内。
[0044] 其中，MS为MS基本培养基，BA为6-苄基腺嘌呤，LFS为灵发素，IBA为吲哚丁酸，NAA为萘乙酸，IAA为吲哚乙酸，MET为多效唑。
[0045] 其中，所述的三叶青藤的组织培养快速繁殖方法，步骤1)中的外植体的获取方法如下：取三叶青藤带腋芽的茎段消毒后接种于繁殖培养基上培养获得不定芽，并在无菌条件下切割得到1.0-2.0cm长的带芽茎段作为外植体，所述繁殖培养基的配方为：MS+1.5mg/L BA+0.4mg/L LFS+0.5mg/L IBA。
[0046] 实施例4：
[0047] 在实施例3的基础上，所述的三叶青藤的组织培养快速繁殖方法，步骤2)中，所述生根炼苗同步化培养基还含有1.2mg/L纳米氧化锌。
[0048] 为了说明本发明的三叶青藤的组织培养快速繁殖方法的效果，本发明的发明人针对上述实施例1-4进行了对比研究，以每组实施例制备5瓶样本，每瓶24株，共100株，分别统计移栽前清洗根部残留培养基得到的生根植株与生根率，以及移栽培养30天后的成活植株数与成活率，结果见下表1。由表1可知，本发明的方法得到的三叶青藤的生根率与成活率均较高。
[0049] 表1不同实施例的生根率与成活率
[0050] 生根植株数/株 生根率％ 成活植株数/株 成活率％
实施例1 95 95 87 91.6
实施例2 92 92 85 92.4
实施例3 93 93 90 96.8
实施例4 99 99 97 98.0
[0051] 本发明的发明人以实施例4为对象，研究含有不同浓度的纳米氧化锌的生根炼苗同步化培养基对三叶青藤组培过程中的生根率与移栽培养30天后的植株成活率的影响，样本数量为5瓶，每瓶24株，共100株，结果见表2。
[0052] 表2不同浓度的纳米氧化锌对三叶青藤组培生根率与成活率的影响[0053]
[0054] 由表2可以看出，纳米氧化锌对三叶青藤生根具有促进作用，随着生根炼苗同步化培养基含有的纳米氧化锌浓度增加，三叶青藤的生根率呈先增加后减少的趋势，而成活率相比相对稳定，但比未添加纳米氧化锌的实施例中，成活率明显提高，说明纳米氧化锌具有促进植株成活的作用。其中，以纳米氧化锌含量为1.2mg/L时，三叶青藤组培得到的生根率最高。
[0055] 尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
