用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物及其用途和分析方法   0    0

本发明涉及一种用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物及其用途和分析方法，分析方法包括如下步骤：(1)基因组DNA提取；(2)TP-M13-SSR分子标记检测；(3)进行遗传结构分析。该组引物是从样本中提取DNA，筛选微卫星位点，从而设计引物。该组引物PCR扩增产物稳定、多态性好，可用于多样性及群体遗传结构的分析。

1.一种用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物，其特征在于，其核苷酸序列为：
BL1F：GGGGTGTGTGAGATAACGC，BL1R：GGAGGCGAAATTTGTTGCT；BL2F：CGTCCATTGGAGAGACATCG，BL2R：TGTATATCGCGCACGGACC；BL3F：AGCCATCGTGATTTCTCCG，BL3R：CGATACACGCGCGTCTATTC；
BL4F：AGCGAGCAAAGGTAGTGGTG，BL4R：CACCGACCATCGTCATTATCT；BL5F：
CGACGTAAAAAGTCATTACGAGTC，BL5R：ATTTCCAATTTGGCACGGTC；BL6F：GCATCGTCTCCTGAACAATC，BL6R：GATACCACTCGCACGAGGT；BL7F：GCGAAGGTGAAACGGAGAA，BL7R：ATAGGCATACGTGCGACAGC；
BL8F：CGTTTCTGTTTGTCATCGACAG，BL8R：AGATGGTTCGGCGATAAAGA；BL9F：
TCAGCATTAAATGGCGTCG，BL9R：CACTTGAGCGCGTTCAATC；BL10F：GTCTGCCTCGTCTCGGATT，BL10R：
AGCGAGCGAGTGAGAGAGTAAG；
引物BL1重复基序为(TC)12，溶解温度Tm为55.5℃，扩增片段大小为162-174；
引物BL2重复基序为(CT)11，溶解温度Tm为55.7℃，扩增片段大小为156-169；
引物BL3重复基序为(TC)13，溶解温度Tm为55.4℃，扩增片段大小为166-182；
引物BL4重复基序为(AG)10TA(AG)7，溶解温度Tm为51.7℃，扩增片段大小为211-215；
引物BL5重复基序为(AG)8，溶解温度Tm为52.9℃，扩增片段大小为130-149；
引物BL6重复基序为(AG)11，溶解温度Tm为51.8℃，扩增片段大小为128-174；
引物BL7重复基序为(AG)9，溶解温度Tm为53.7℃，扩增片段大小为157-167；
引物BL8重复基序为(AG)10，溶解温度Tm为53.0℃，扩增片段大小为155-177；
引物BL9重复基序为(GA)11，溶解温度Tm为54.4℃，扩增片段大小为172-184；
引物BL10重复基序为(GA)11，溶解温度Tm为55.7℃，扩增片段大小为282-292。

2.如权利要求1所述用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物的用途，其特征在于，用于蝇蛹金小蜂群体遗传结构分析。

3.如权利要求2所述用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物的用途的分析方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)基因组DNA提取；
(2)TP-M13-SSR分子标记检测；
(3)进行遗传结构分析。

4.如权利要求3所述用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物的用途的分析方法，其特征在 于，步骤(1)中具体包括如下步骤：
1)从样本中取出个体；
2)容器中研磨成粉末，加入Buffer Digestion，震荡混匀；
3)水浴至细胞完全裂解；
4)加入Buffer PA，充分颠倒混匀；
5)离心，将上清液转移到新的容器；
6)加入等体积的异丙醇，充分混匀，室温放置；
7)离心，弃上清；
8)加入乙醇，颠倒漂洗，离心弃上清；
9)开盖室温倒置至残留的乙醇完全挥发；
10)得到的DNA用TE Buffer溶解；
11)收集DNA，保存。

5.如权利要求4所述用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物的用途的分析方法，其特征在于，步骤(1)中采用动物基因组DNA抽提试剂盒进行DNA提取。

6.如权利要求4或5所述用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物的用途的分析方法，其特征在于，步骤(3)中用popgen3.2进行等位基因数、有效等位基因数、基因多样性等分析。

7.如权利要求4或5所述用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物的用途的分析方法，其特征在于，步骤1)中从样本中取出60个体，用双蒸水浸泡清洗。

8.如权利要求4或5所述用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物的用途的分析方法，其特征在于，步骤2)中加到1.5ml离心管中，研磨成粉末，加入400μL Buffer Digestion，震荡混匀。

9.如权利要求4或5所述用于蝇蛹金小蜂多样性分析的微卫星引物的用途的分析方法，其特征在于，步骤3)65℃水浴1小时至细胞完全裂解；步骤4)加入200μLBuffer PA，充分颠倒混匀，置于-20℃冰箱放置5min；步骤5)室温10000rpm离心5min，将500-550μL上清液转移到新的1.5ml离心管中；步骤6)加入等体积的异丙醇，颠倒5-8次使之充分混匀，室温放置2-
3min；步骤7)室温10000rpm离心5min，弃上清；步骤8)加入1ml75％乙醇，颠倒漂洗1-3min，
10000rpm离心2min，弃上清，且此步骤8)重复2次；步骤9)开盖室温倒置5-10min至残留的乙醇完全挥发；步骤10)得到的DNA用20μLTE Buffer溶解；步骤11)收集DNA，-20℃保存。