[0005] 为解决上述技术问题，本发明提供一种荧光探针及其制备方法、牛奶中土霉素的检测方法。利用荧光碳点检测克服了传统检测方法的成本高、实验步骤复杂而耗时以及实验所用部分试剂有毒等缺点，具有灵敏度高、选择性和稳定性好、检测成本低、方法操作和样品处理简单等优点。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
[0007] 一种荧光探针，由以单宁酸为碳源合成的表面酚羟基化的碳点与Fe3+溶液中的Fe3+结合组成。
[0008] 一种荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
[0009] (1)将单宁酸溶解在蒸馏水中，加热至180℃反应2h，冷却后，透析除杂，真空干燥，得到黑色粉末状碳点，溶于二次蒸馏水，获得碳点溶液；
[0010] (2)向pH为7的柠檬酸-NaHPO4缓冲溶液中加入碳点溶液和Fe3+溶液，制备得到荧光探针。
[0011] 步骤(2)中碳点在制备得到的荧光探针体系中浓度为0.5±0.02mg/mL；
[0012] 步骤(2)中所用Fe3+溶液中含有Fe3+的浓度为10-4M。
[0013] 步骤(1)制备碳点溶液的具体步骤为：
[0014] 称取0.1035g单宁酸，加40mL蒸馏水溶解，转移到聚四氟乙烯反应釜内衬中并装好钢套,于烘箱中逐渐加热到180℃并恒温2h,自然冷却至室温，用切割分子量为2000的透析袋于二次水中透析1天除去杂质，透析后的碳点溶液在12000r/min的转速下离心15min，除去聚集的大颗粒，收集滤液，最后于真空干燥箱中干燥48h,即得到黑色粉末状碳点,称重并溶于二次水中,即得质量浓度的碳点溶液；
[0015] 步骤(2)制备荧光探针的具体步骤为:
[0016] 在5mL干净的具塞试管中依次加入300μL pH为7的柠檬酸-NaHPO4缓冲溶液，200μL上述合成的碳点溶液，10-4M的Fe3+溶液350μL，定容至5ml,制备得到荧光探针，碳点在该体系中浓度为0.5±0.02mg/mL。
[0017] 一种牛奶中土霉素的检测方法，包括以下步骤：
[0018] 平行取上述荧光探针若干份，加入pH值为7.0的柠檬酸-NaHPO4缓冲溶液，再加入不同浓度的盐酸土霉素标准溶液，分别检测加入盐酸土霉素标准溶液前后荧光探针的荧光强度，根据加入土霉素前后体系的发射峰处荧光强度的增加值与未加土霉素时体系的发射峰处荧光强度的比值和盐酸土霉素的浓度建立线性公式；在相同条件下检测加入牛奶前后探针的荧光强度，根据线性公式计算出牛奶中土霉素的具体含量。
[0019] 由于碳点性质受pH值变化影响较大，本发明使用的碳点在pH为7的条件下具有很好的荧光性能，且pH为7时Fe3+对CDs的猝灭效率也最好，而土霉素在中性条件下具有很强的络合作用。所以利用缓冲液调节pH值为7最为合适。碳点发射峰位置的选择决定了检测体系是否具有灵敏的荧光强度变化，为了实现对土霉素浓度的灵敏响应，将碳点的激发波长设定在440nm。
[0020] 本发明方法线性范围为0-3.5μmol/L，检测限为2.28×10-8M，回收率介于92.5％到103.0％之间。
[0021] 本发明涉及的方法具有高的灵敏度、选择性和稳定性，且检测成本低；方法操作和样品处理简单，整个检测过程只需要二十分钟；利用线性公式还可以很好的对牛奶中土霉素的含量进行定量检测。
