首页 > 专利 > 福建师范大学 > 珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法专利详情

珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法 0 0

有效专利查看PDF

申请进展

基本信息

申请人信息

代理人信息

摘要

法律状态

权利要求

说明书

专利申请流程有哪些步骤？

申请

申请号：指国家知识产权局受理一件专利申请时给予该专利申请的一个标示号码。唯一性原则。

申请日：提出专利申请之日。

2017-05-11

申请公布

申请公布指发明专利申请经初步审查合格后，自申请日（或优先权日）起18个月期满时的公布或根据申请人的请求提前进行的公布。

申请公布号：专利申请过程中，在尚未取得专利授权之前，国家专利局《专利公报》公开专利时的编号。

申请公布日：申请公开的日期，即在专利公报上予以公开的日期。

2019-11-01

授权

授权指对发明专利申请经实质审查没有发现驳回理由，授予发明专利权；或对实用新型或外观设计专利申请经初步审查没有发现驳回理由，授予实用新型专利权或外观设计专利权。

2021-06-25

预估到期

发明专利权的期限为二十年，实用新型专利权期限为十年，外观设计专利权期限为十五年，均自申请日起计算。专利届满后法律终止保护。

2037-05-11

基本信息

有效性	有效专利	专利类型	发明专利
申请号	CN201710331492.6	申请日	2017-05-11
公开/公告号	CN107410757B	公开/公告日	2021-06-25
授权日	2021-06-25	预估到期日	2037-05-11
申请年	2017年	公开/公告年	2021年
缴费截止日
分类号	A23K50/80 、A23K10/22 、A23K10/26 、A23K20/158 、A23K20/174 、A23K10/18 、A23K10/14	主分类号	A23K50/80
是否联合申请	独立申请	文献类型号	B
独权数量	1	从权数量	10
权利要求数量	11	非专利引证数量	1
引用专利数量	0	被引证专利数量	0
非专利引证	1、牟奕林等.尖锐轴孔珊瑚的人工养殖《.中国水产》.2009,(第03期),;
引用专利		被引证专利
专利权维持	5	专利申请国编码	CN
专利事件		事务标签	公开、实质审查、授权

申请人信息

申请人	福建师范大学	第一申请人	福建师范大学
专利权人	福建师范大学	当前专利权人	福建师范大学
发明人	黄镇、陈多、黄祖新、张彦定、陈由强	第一发明人	黄镇
地址	福建省福州市闽侯县上街镇大学城福建师范大学科技处	邮编	350108
申请人数量	1	发明人数量	5
申请人所在省	福建省	申请人所在市	福建省福州市

代理人信息

代理机构

专利代理机构是经省专利管理局审核，国家知识产权局批准设立，可以接受委托人的委托，在委托权限范围内以委托人的名义办理专利申请或其他专利事务的服务机构。

福州君诚知识产权代理有限公司

代理人

专利代理师是代理他人进行专利申请和办理其他专利事务，取得一定资格的人。

李春连

摘要

本发明属于珊瑚人工养殖技术领域。具体涉及珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法。具体为：以虾肉、贻贝性腺、鱼油为原料，加入复合蛋白酶进行酶解制成酶解清液与鱼油混合液备用；以石莼液和微绿球藻为原料制成拟微绿球藻与石莼混合液备用；将酿酒酵母种子液、产朊假丝酵母种子液和深红红螺菌种子液制成混合菌种子液备用；将上述备用液加入复合维生素，得到珊瑚人工养殖复合液体饵料。本发明目制备的珊瑚人工养殖复合液体饵料，营养成分全面，均衡性好；饵料无害且兼净化水质的功效，可提高人工珊瑚养殖的成活率、和生长速度。

摘要附图
说明书附图：[0009]
说明书附图：[0046]
说明书附图：[0052]
说明书附图：[0081]

法律状态

序号	法律状态公告日	法律状态	法律状态信息
1	2021-06-25	授权
2	2019-11-01	实质审查的生效	IPC(主分类): A23K 50/80 专利申请号: 201710331492.6 申请日: 2017.05.11
3	2017-12-01	公开

权利要求

权利要求书是申请文件最核心的部分，是申请人向国家申请保护他的发明创造及划定保护范围的文件。

1.一种珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法，其特征是：
酶解清液与鱼油混合液的制备
（1）重量体积份配比：
虾肉                            500～520g
贻贝性腺                        480～500g
鱼油                            5～7g
海水                            1000mL
（2）制备：
在虾肉和贻贝性腺中加海水，通过搅碎机搅碎成虾肉和贻贝性腺碎屑液，加虾肉和贻贝性腺碎屑液重量的0.18～0.22 %复合蛋白酶进行酶解得到酶解液，酶解液通过200目尼龙布过滤后酶解清液；酶解清液中加入鱼油，混合制成酶解清液与鱼油混合液，在6～8℃冷藏备用；
拟微绿球藻与石莼混合液的制备
（1）重量、体积份配比：
石莼液                           200‑250g
拟微绿球藻                       200‑250g
海水                             1000mL
（2）制备
将新鲜石莼洗净去杂处理后，放入磨碎机进行研磨处理，研磨后的石莼碎屑悬浮液通过 200 目筛绢网袋过滤，得到石莼液于4℃下保存；拟微绿球藻（Nannnochloropsis gaditana）藻种经扩增培养后，离心机沉淀藻体；取拟微绿球藻沉淀藻体和石莼液混合，加入海水，制成拟微绿球藻与石莼混合液，在8～10℃冷藏备用；
拟微绿球藻培养基为人工海水f/2培养基；培养条件: 初始接种藻细胞密度为(4～8)
4 －2 －1
×10个/mL；试验所采用光照强度为100 μmol·m ·s ，培养温度为25℃，光暗比为12h光照∶12h黑暗；
混合菌种子液的制备
将酿酒酵母种子液、产朊假丝酵母种子液和深红红螺菌种子液按照1: 1:4的体积比例混合，制成混合菌种子液，在10～14℃冷藏备用；
珊瑚人工养殖复合液体饵料的制备
将以上酶解清液与鱼油混合液、拟微绿球藻、石莼混合液、混合菌种子液按照3:2:1的体积比例混合均匀成复合液体，按照复合液体总重量的5%加入复合维生素，溶解后得到所述的珊瑚人工养殖复合液体饵料。

2.根据权利要求1所述的一种珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法，其特征是所述的海水，是指将海水煮沸5分钟后再冷却至常温的海水。

3.根据权利要求1所述的一种珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法，其特征是所述的复合蛋白酶由酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶按1:1重量比例构成。

4.根据权利要求1所述的一种珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法，其特征是所述的酶解，其条件为：pH为4.0, 酶解温度为45～55℃, 酶解时间为48～60 h。

5.根据权利要求1所述的一种珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法，其特征是所述的酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）种子液由8°Bx米曲汁和10°Bx麦芽汁按照5:2的体积比例混合，接种酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）种子并置于摇床上进行酿酒酵母培养得到的酿酒酵母种子液。

6.根据权利要求1所述的一种珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法，其特征是所述的酿酒酵母培养，其温度为 28℃～30℃，培养时间为72～96 小时，摇床转速120转/分。

7.根据权利要求1所述的一种珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法，其特征是所述的产朊假丝酵母（Candida utilis）种子液由8°Bx米曲汁和10°Bx麦芽汁按照5:1的体积比例混合，接种产朊假丝酵母（Candida utilis）种子并进行摇床培养，得到的产朊假丝酵母种子液。

8.根据权利要求1所述的一种珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法，其特征是所述的产朊假丝酵母摇床培养，其温度为 28℃～30℃，培养时间为72～96 小时，摇床转速
120转/分。

9.根据权利要求1所述的一种珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法，其特征是所述的深红红螺菌(Rhodospirillum rubrum）种子培养液组成按重量百分比为：氯化铵 0.1～0.2％、碳酸氢钠、0.04～0.8％、磷酸氢二钾 0.05～0.1％、乙酸钠 0.20～0.40％、硫酸镁 0.02～0.04％，余量为无菌水，经调节种子培养液pH为7.8后，将深红红螺菌种子接种到培养液中，在自然光照下进行静止培养得到的深红红螺菌种子液。

10.根据权利要求9所述的一种珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法，其特征是所述的静止培养，其条件为：培养温度为 30℃～32℃，培养时间为96～120小时。

11.根据权利要求1所述的一种珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法，其特征是所述的复合维生素配比为：硫胺素26mg、核黄素105 mg、烟酸510 mg、泛酸钙105 mg、维生素B6
105 mg、维生素B12 0.26 mg、生物素1.2 mg、叶酸12 mg。

说明书

技术领域

[0001] 本发明属于珊瑚人工养殖技术领域。具体涉及珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法。

背景技术

[0002] 近年来，虽然活体珊瑚养殖在商业化水族市场的比重越来越大，但是国产活体珊瑚几乎完全来自于野外捕获；市场的需求与珊瑚人工养殖科研的现状存在脱节，针对满足市场需求的国产珊瑚繁育研究报道几乎没有。在珊瑚优良观赏性状筛选、良种培育、产业化等方面均为空白。水族箱中的珊瑚处于良好的环境(例如，水质指标合适，水流，水温，光照系统，钙含量等)，在水族箱中的珊瑚会自然增加。主要是无性繁殖形式，母体会产生分枝。在发芽过程中，一个新珊瑚(芽体)会在母体的边上长出，随着芽体的生长，会逐渐脱离母体，新的珊瑚个体产生了。开展水族箱中珊瑚人工养殖是一种获得更多珊瑚的有效办法，更重要的是，可以减少野外采集的数量，保护自然珊瑚礁环境。

[0003] 珊瑚的“食谱”中，珊瑚虫体内的虫黄藻是珊瑚虫的重要营养源。虫黄藻可以通过光照等适宜条件珊瑚可以自行解决。单依靠虫黄藻不能满足珊瑚生长的营养需要，需要补充动物性饵料。单细胞的浮游动物、甲壳类小动物以及多毛类、贝壳类、棘皮动物的幼虫都被列为主要的饵料。虽然这些鲜活饵料，投喂方便，管理简便。但鲜活饵料来源有限，受季节性影响很大，生长密度也很低，给鲜活饵料的采集造成困难，这也给大规模珊瑚人工养殖生产产生了制约因素。相对于天然鲜活饵料，对珊瑚的人工饵料的研究更少。虽然市场上存有各种类型的珊瑚人工饵料，但这些人工饵料的作用一般缺乏科学研究数据与证据，这些珊瑚人工饵料替代食物营养价值较低，在水体中保形性差，影响珊瑚类食用，而且还会对水环境造成严重的污染。导致养殖水环境氨氮超标、水质恶化，进而引发细菌和病毒等病原微生物大量滋生等问题。一些研究表明，多数商业人工饵料并不能提高珊瑚的生长率，反而可能引起水体富营养化及珊瑚白化。

发明内容

[0004] 本发明目的是针对现有水族市场珊瑚人工养殖的饵料技术不足，制备一种珊瑚人工养殖复合液体饵料，其营养成分比较全面，饵料的营养均衡性好，饵料无毒、无害，饵料兼具营养和净化水质的功效，在水中的稳定性好，性价比高，比同等营养价值饵料成本低50％以上。该复合液体饵料能提高水族市场珊瑚人工养殖的成活率、和生长速度。

[0005] 为实现本发明的目的采用的技术方案是：

[0006] 1、酶解清液与鱼油混合液的制备

[0007] (1)重量体积份配比：

[0008]

[0009] (2)制备：

[0010] 在虾肉和贻贝性腺中加海水，通过搅碎机搅碎成虾肉和贻贝性腺碎屑液，加虾肉和贻贝性腺碎屑液重量的0.18～0.22％复合蛋白酶进行酶解得到酶解液，酶解液通过200目尼龙布过滤后酶解清液；酶解清液中加入鱼油，混合制成酶解清液与鱼油混合液，在6～8℃冷藏备用。

[0011] 所述的海水，是指将海水煮沸5分钟后再冷却至常温的海水。

[0012] 所述的鱼油是购自汤臣倍健股份有限公司的深海鱼油。

[0013] 所述的复合蛋白酶由酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶按1:1重量比例构成。

[0014] 所述的酶解，其条件为：pH为4.0,酶解温度为45～55℃,酶解时间为48～60h。虾肉和贻贝性腺酶解液的蛋白回收率和水解度分别为80～83％和42～46％。

[0015] 2、拟微绿球藻与石莼混合液的制备

[0016] (1)重量、体积份配比：

[0017] 石莼液 200‑250g

[0018] 拟微绿球藻 200‑250g

[0019] 海水 1000mL

[0020] (2)制备

[0021] 将新鲜石莼洗净去杂处理后，放入磨碎机进行研磨处理，研磨后的石莼碎屑悬浮液通过200目筛绢网袋过滤，得到石莼液于4℃下保存。拟微绿球藻(Nannnochloropsis gaditana)藻种经扩增培养后，离心机沉淀藻体。取拟微绿球藻沉淀藻体和石莼液混合，加入海水，制成拟微绿球藻与石莼混合液，在8～10℃冷藏备用。

[0022] 所述的拟微绿球藻的藻种扩增培养：拟微绿球藻培养基为人工海水(f/2)培养基；4
培养条件:初始接种藻细胞密度为(4～8)×10个/mL。试验采所用光照强度为100μmol·m－2 －1
·s ，培养温度为25℃，光暗比为12h光照∶12h黑暗。

[0023] 所述的海水，是指将海水煮沸5分钟后再冷却至常温的海水。

[0024] 3、混合菌种子液的制备

[0025] 将酿酒酵母种子液、产朊假丝酵母种子液和深红红螺菌种子液按照1:1:4的体积比例混合，制成混合菌种子液，在10～14℃冷藏备用。

[0026] 所述的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)种子液由8°Bx米曲汁和10°Bx麦芽汁按照5:2的体积比例混合，接种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)种子并置于摇床上进行酿酒酵母培养得到的酿酒酵母种子液。

[0027] 所述的酿酒酵母培养，其温度为28℃～30℃，培养时间为72～96小时，摇床转速120转/分。培养结束时，酿酒酵母种子液中每毫升含酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌数≥10个亿。

[0028] 所述的产朊假丝酵母(Candida utilis)种子液由8°Bx米曲汁和10°Bx麦芽汁按照5:1的体积比例混合，接种产朊假丝酵母(Candida utilis)种子并进行摇床培养，得到的产朊假丝酵母种子液。

[0029] 所述的产朊假丝酵母摇床培养，其温度为28℃～30℃，培养时间为72～96小时，摇床转速120转/分。培养结束时，产朊假丝酵母种子液中每毫升含产朊假丝酵母菌数≥10个亿。

[0030] 所述的深红红螺菌(Rhodospirillum rubrum)种子培养液组成按重量百分比为：氯化铵0.1～0.2％、碳酸氢钠、0.04～0.8％、磷酸氢二钾0.05～0.1％、乙酸钠0.20～
0.40％、硫酸镁0.02～0.04％，余量为无菌水，经调节种子培养液pH为7.8后，将深红红螺菌种子接种到培养液中，在自然光照下进行静止培养得到的深红红螺菌种子液。

[0031] 所述的静止培养，其条件为：培养温度为30℃～32℃，培养时间为96～120小时。培养结束时，深红红螺菌种子液中每毫升含深红红螺菌菌数≥20个亿。

[0032] 4、珊瑚人工养殖复合液体饵料的制备

[0033] 将以上步骤(1)酶解清液与鱼油混合液、步骤(2)拟微绿球藻、石莼混合液、步骤(3)混合菌种子液按照3:2:1的体积比例混合均匀成复合液体，按照复合液体总重量的5％加入复合维生素，溶解后得到本发明所述的珊瑚人工养殖复合液体饵料。其使用时，可用针管吸取，注入珊瑚体腔及珊瑚小穗周围即可。

[0034] 所述的复合维生素配比为：硫胺素26mg、核黄素105mg、烟酸510mg、泛酸钙105mg、维生素B6 105mg、维生素B12 0.26mg、生物素1.2mg、叶酸12mg。

[0035] 所述的8°Bx米曲汁，其制备过程如下：

[0036] (1)蒸饭：糯米清洗后，清水浸泡6h至米粒呈乳白色，将水沥干，倒入蒸饭机连续蒸饭，得到熟透的糯米饭。

[0037] (2)淋饭搭窝：糯米饭经过输送带喷水淋饭，让饭粒吸水膨胀，糯米饭冷却温度控制在40℃。每个酒缸倒入50斤糯米的蒸饭量，加入甜酒药和红曲粉，拌匀，压平实，中间挖个井状窝，进行搭窝糖化。

[0038] (3)糖化：搭窝糖化48h后，井状窝中出现少量糖化液，冲入清水，停留24小时，可以通过压榨过滤得到浅黄色的浓甜味米曲汁。用时将滤液稀释至所需糖度。

[0039] 所述的10°Bx麦芽汁，其制备过程如下：

[0040] 所述的10°Bx麦芽汁制备：称1500g麦芽粉,加水4500ml，置于55℃保温水浴糖化4小时，即可取出过滤。将滤液装瓶灭菌备用。用时将滤液稀释至所需糖度。

[0041] 所述的菌株产朊假丝酵母(Candida utilis)编号：2.1495；酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)编号：2.596；深红红螺菌(Rhodospirillum rubrum)编号：1.3369，均购自中国普通微生物菌种保藏管理中心。

[0042] 所述的石莼(Ulva lactuca L.)、拟微绿球藻(Nannnochloropsis gaditana)、酸性蛋白酶、木瓜蛋白酶、鱼油、虾肉、贻贝、维生素均购自市场。

[0043] 采用本发明所述的复合液体饵料对珊瑚进行50天的人工养殖(试验组)，与相同水环境无添加饵料自然生长的同品种人工养殖的珊瑚(对照组1)以及市场购买的人工饵料同品种人工养殖的珊瑚(对照组2)进行试验对照，其生长增重情况如下表。

[0044] 表50天喂养肉质软珊瑚生长情况

[0045]

[0046] 表中数据显示，采用本发明所述的复合液体饵料对珊瑚进行人工养殖的肉质软珊瑚，经过50天的养殖后，从起始湿重223.28增加到341.43克，净增118.15克，天均生长率达到2.36。

[0047] 而对照组1、对照组2天均生长率仅为0.32和0.92，大大低于本发明制备的复合液体饵料。表明本发明制备的复合液体饵料，营养均衡性好，能提高珊瑚的成活率和生长速度，同时兼具营养和净化水质的功效。

实施方案

[0048] 实施例1

[0049] 1、酶解清液与鱼油混合液的制备

[0050] (1)重量体积份配比：

[0051]

[0052] (2)制备：

[0053] 在虾肉和贻贝性腺中加海水，通过搅碎机搅碎成虾肉和贻贝性腺碎屑液，加0.036kg的复合蛋白酶进行酶解得到酶解液，酶解液通过200目尼龙布过滤后酶解清液；酶解清液中加入0.07kg鱼油，混合制成酶解清液与鱼油混合液，在6℃冷藏备用。

[0054] 所述的海水，是指将海水煮沸5分钟后再冷却至常温的海水。

[0055] 所述的复合蛋白酶由酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶按1:1的重量比例构成。

[0056] 所述的酶解，其条件为：pH为4.0,酶解温度为55℃,酶解时间为48h。虾肉和贻贝性腺酶解液的蛋白回收率和水解度分别为82.5％和42.6％。

[0057] 2、拟微绿球藻与石莼混合液的制备

[0058] (1)重量、体积份配比：

[0059] 石莼液 2.5kg

[0060] 拟微绿球藻 2kg

[0061] 海水 10L

[0062] (2)制备

[0063] 将新鲜石莼洗净去杂处理后，放入磨碎机进行研磨处理，研磨后的石莼碎屑悬浮液通过200目筛绢网袋过滤，得到石莼液于4℃下保存。拟微绿球藻(Nannnochloropsis gaditana)种子经扩增培养后，离心机沉淀藻体。取拟微绿球藻沉淀藻体和石莼液混合，加入海水，制成拟微绿球藻与石莼混合液，8℃冷藏备用。

[0064] 所述的海水，是指将海水煮沸5分钟后再冷却至常温的海水。

[0065] 3、混合菌种子液的制备

[0066] 分别取0.5L酿酒酵母种子液、0.5L产朊假丝酵母种子液和2L深红红螺菌种子液按照1:1:4的体积比例，混合制成混合菌种子液3L，在14℃冷藏备用。

[0067] 所述的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)种子液由8°Bx米曲汁和10°Bx麦芽汁按照5:2的体积比例混合，接种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)种子并置于摇床上，进行酿酒酵母培养得到的酿酒酵母种子液。

[0068] 所述的酿酒酵母培养，其温度为30℃，培养时间为72小时，摇床转速120转/分。培养结束时，酿酒酵母种子液中每毫升含酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌数＝10.24个亿。

[0069] 所述的产朊假丝酵母(Candida utilis)种子液由8°Bx米曲汁和10°Bx麦芽汁按照5:1的体积比例混合，接种产朊假丝酵母(Candida utilis)种子并置于摇床上，进行产朊假丝酵母培养得到的产朊假丝酵母种子液。

[0070] 所述的产朊假丝酵母培养，其温度为30℃，培养时间为80小时，摇床转速120转/分。培养结束时，产朊假丝酵母种子液中每毫升含产朊假丝酵母菌数＝11.74个亿。

[0071] 所述的深红红螺菌(Rhodospirillum rubrum)种子培养液组成按重量百分比为：氯化铵0.2％、碳酸氢钠、0.04％、磷酸氢二钾0.05％、乙酸钠0.40％、硫酸镁0.02％，余量为无菌水，经调节种子培养液pH为7.8后，将深红红螺菌种子接种到种子培养液，在自然光照下进行静止培养，得到的深红红螺菌种子液。

[0072] 所述的静止培养，其条件为：培养温度为32℃，培养时间为100小时。培养结束时，深红红螺菌种子液中每毫升含深红红螺菌菌数＝21.85个亿。

[0073] (4)珊瑚人工养殖复合液体饵料的制备

[0074] 将以上步骤(1)酶解清液与鱼油混合液6L、步骤(2)拟微绿球藻、石莼混合液4L、步骤(3)混合菌种子液2L混合均匀成复合液体，按照复合液体总重量的5％加入复合维生素，搅匀溶解后得到本发明所述的珊瑚人工养殖复合液体饵料。其使用时，可用50mL针管吸取，注入珊瑚体腔及珊瑚小穗周围即可。

[0075] 所述的复合维生素配比为：硫胺素26mg、核黄素105mg、烟酸510mg、泛酸钙105mg、维生素B6 105mg、维生素B12 0.26mg、生物素1.2mg、叶酸12mg。

[0076] 实施例2

[0077] 实施例1

[0078] 1、酶解清液与鱼油混合液的制备

[0079] (1)重量体积份配比：

[0080]

[0081] (2)制备：

[0082] 在虾肉和贻贝性腺中加海水，通过搅碎机搅碎成虾肉和贻贝性腺碎屑液，加0.072kg的复合蛋白酶进行酶解得到酶解液，酶解液通过200目尼龙布过滤后酶解清液；酶解清液中加入0.14kg鱼油，混合制成酶解清液与鱼油混合液，在6℃冷藏备用。

[0083] 所述的海水，是指将海水煮沸5分钟后再冷却至常温的海水。

[0084] 所述的复合蛋白酶由酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶按1:1的重量比例构成。

[0085] 所述的酶解，其条件为：pH为4.0,酶解温度为55℃,酶解时间为48h。虾肉和贻贝性腺酶解液的蛋白回收率和水解度分别为82.0％和45.5％。

[0086] 2、拟微绿球藻与石莼混合液的制备

[0087] (1)重量、体积份配比：

[0088] 石莼液 5.0kg

[0089] 拟微绿球藻 4kg

[0090] 海水 20L

[0091] (2)制备

[0092] 将新鲜石莼洗净去杂处理后，放入磨碎机进行研磨处理，研磨后的石莼碎屑悬浮液通过200目筛绢网袋过滤，得到石莼液于4℃下保存。拟微绿球藻(Nannnochloropsis gaditana)种子经扩增培养后，离心机沉淀藻体。取拟微绿球藻沉淀藻体和石莼液混合，加入海水，制成拟微绿球藻与石莼混合液，8℃冷藏备用。

[0093] 所述的海水，是指将海水煮沸5分钟后再冷却至常温的海水。

[0094] 3、混合菌种子液的制备

[0095] 分别取1L酿酒酵母种子液、1L产朊假丝酵母种子液和4L深红红螺菌种子液按照1:1:4的体积比例，混合制成混合菌种子液6L，在14℃冷藏备用。

[0096] 所述的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)种子液由8°Bx米曲汁和10°Bx麦芽汁按照5:2的体积比例混合，接种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)种子并置于摇床上，进行酿酒酵母培养得到的酿酒酵母种子液。

[0097] 所述的酿酒酵母培养，其温度为28℃，培养时间为90小时，摇床转速120转/分。培养结束时，酿酒酵母种子液中每毫升含酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌数＝11.56个亿。

[0098] 所述的产朊假丝酵母(Candida utilis)种子液由8°Bx米曲汁和10°Bx麦芽汁按照5:1的体积比例混合，接种产朊假丝酵母(Candida utilis)种子并置于摇床上，进行产朊假丝酵母培养得到的产朊假丝酵母种子液。

[0099] 所述的产朊假丝酵母培养，其温度为28℃，培养时间为96小时，摇床转速120转/分。培养结束时，产朊假丝酵母种子液中每毫升含产朊假丝酵母菌数＝12.85个亿。

[0100] 所述的深红红螺菌(Rhodospirillum rubrum)种子培养液组成按重量百分比为：氯化铵0.2％、碳酸氢钠、0.04％、磷酸氢二钾0.05％、乙酸钠0.40％、硫酸镁0.02％，余量为无菌水，经调节种子培养液pH为7.8后，将深红红螺菌种子接种到种子培养液，在自然光照下进行静止培养，得到的深红红螺菌种子液。

[0101] 所述的静止培养，其条件为：培养温度为30℃，培养时间为120小时。培养结束时，深红红螺菌种子液中每毫升含深红红螺菌菌数＝22.15个亿。

[0102] (4)珊瑚人工养殖复合液体饵料的制备

[0103] 将以上步骤(1)酶解清液与鱼油混合液12L、步骤(2)拟微绿球藻、石莼混合液8L、步骤(3)混合菌种子液4L混合均匀成复合液体，按照复合液体总重量的5％加入复合维生素，搅匀溶解后得到本发明所述的珊瑚人工养殖复合液体饵料。其使用时，可用50mL针管吸取，注入珊瑚体腔及珊瑚小穗周围即可。

[0104] 所述的复合维生素配比为：硫胺素26mg、核黄素105mg、烟酸510mg、泛酸钙105mg、维生素B6 105mg、维生素B12 0.26mg、生物素1.2mg、叶酸12mg。