实施方案
[0020] 下面结合具体实施例及其附图对本发明做进一步的分析。
[0021] 偶氮染料金橙II降解菌，其菌株是氧化微杆菌Microbacterium oxydans的菌株L-11，于2014年5月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址：
北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC NO.9130。
[0022] 1.菌株的分离和鉴定
[0023] 取污染土壤10g，置于100ml的无菌水中，振荡5min，得土壤菌悬液；取5ml的土壤菌悬液，加入到100ml的无机盐培养基[NH4NO3：407mg/L；KH2PO4：98mg/L；K2HPO4：33mg/L；NaCl：30mg/L；MgSO4：200mg/L；pH7.0]中，添加金橙II作为碳源，置于30℃，150r/min摇床培养获得富集液，连续在添加金橙II的培养基平板上涂布，直到获得金橙II的降解菌株。该降解菌命名为L-11，进一步纯化并鉴定为氧化微杆菌Microbacterium oxydans。L-11菌株主要生物学特性菌落圆形不透明，培养1～3天菌落为白色，继续培养菌活为黄色，液体培养为黄色。培养最适温度28～30℃，pH7.2。该菌属放线菌。能以金橙II为碳源进行生长，最适生长温度为30℃。在实验室摇瓶培养条件下金橙II的降解率达75﹪以上。该菌可以用发酵工业通用发酵设备进行生产。
[0024] 2.实验室生物降解实验
[0025] 2.1接种量对L-11降解效率的影响
[0026] 菌株L-11在LB培养基(LB培养基配方g/L：酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl10g/L,pH7.0)中培养至对数期，按0.5﹪、1﹪、2﹪、3﹪、4﹪、5﹪的接种量分别接种到培养液[无机盐培养基[NH4NO3：407mg/L；KH2PO4：98mg/L；K2HPO4：33mg/L；NaCl：30mg/L；MgSO4：200mg/L；pH7.0]，置于30℃、150r/min摇床培养，在培养后24h分别测定培养液在600nm处的OD值。结果如图1所示，接种量越大，金橙II的降解效率就越高；当接种量大于2﹪时在增大接种量对金橙II降解影响不大。虽然菌体的生长量随着接种量增加而提高，考虑到菌体生长情况以及经济的原因，采用1﹪的接种量即可达到要求。
[0027] 2.2pH对L-11降解效率的影响
[0028] pH值是影响微生物生长和生存的另一个重要环境因素，微生物生长有一个适宜的pH值范围，超过适宜生长的pH值范围，大多数微生物都不能很好人的生长。
[0029] 菌株L-11在LB培养基(LB培养基配方g/L：酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl10g/L,pH7.0)中培养至对数期；按1﹪的接种量分别接种到七种不同pH的培养液，其中培养液[无机盐培养基[NH4NO3：407mg/L；KH2PO4：98mg/L；K2HPO4：33mg/L；NaCl：30mg/L；MgSO4：200mg/L；pH7.0]pH值分别调至4.0、6.0、7.0、8.0、10.0；置于30℃、150r/min摇床培养，在培养后8h、16h、24h和32h分别测定培养液在600nm处的OD值。pH对菌株L-11生长的影响如图2所示。
结果表明：L-11菌株生长的适宜pH值范围在7～10，最佳pH值为7～8。
[0030] 2.3温度对L-11降解效率的影响
[0031] 温度是影响微生物生长和生存的最重要的环境因素之一。菌株L-11在LB培养基(LB培养基配方g/L：酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl10g/L,pH7.0)中培养至对数期，按1﹪的接种量接种到培养液[无机盐培养基[NH4NO3：407mg/L；KH2PO4：98mg/L；K2HPO4：33mg/L；NaCl：30mg/L；MgSO4：200mg/L；pH7.0]，分别置于18℃、28℃、30℃、33℃、37℃下培养，在培养后8h、16h和24h分别测定培养液在600nm处的OD值。温度对菌株L-11生长的影响如图3所示。结果表明：在实验的温度范围内，菌体均有不同程度的生长，温度为28～30℃时，生长最好，超过或低于该温度时，菌体生长速度减慢，而在37℃下培养时，菌种易老化。因此，L-11的最佳生长温度为28～30℃。3.生产实施例
[0032] 将金橙II降解菌的试管种接种到发酵培养基中，振荡培养至对数期，准备接种种子罐；然后将上述培养好的菌种按10﹪的接种量接种到500L种子罐，恒温培养至对数生长期，无菌空气的通气量为1:0.6～1.2，培养温度为30℃，搅拌速度为180～240r/min，种子罐所用的培养基配方的质量含量为：葡萄糖0.1﹪，蛋白胨0.5﹪，酵母膏0.25﹪，用无菌水配制，pH7.2～7.5；将种子罐中的种子液按10﹪接种量接入生产罐中培养，生产罐所用培养基与种子罐培养基相同，无菌空气的通气量为1:0.6～1.2，培养温度为30℃，搅拌速度为180～240r/min，整个工艺流程培养时间为48～60h。发酵结束后菌体数量达到10亿个/ml以上。
[0033] 发酵完成后培养液出罐直接用塑料包装桶或包装瓶分装成液体剂。该液体剂即为菌剂。
