实施方案
[0030] 实施例1、一种能够促进丹参毛状根中丹参酮(隐丹参酮和二氢丹参酮I)积累的诱导方法,依次进行以下步骤:
[0031] 1)、丹参毛状根的初培养:
[0032] 在超净台中,称取0.2g丹参毛状根放入装有50ml的6,7-V培养基中(100ml锥形瓶,pH:5.8),摇床转速110rpm,25℃下黑暗培养18天。
[0033] 2)、丹参毛状根的继续培养:
[0034] 丹参毛状根培养18天后,添加硝酸铈,使6,7-V培养基中硝酸铈的终浓度为50μM;于110rpm,25℃的黑暗条件下诱导培养6天。
[0035] 诱导6天后收集毛状根,用蒸馏水冲洗,再用干净的纸吸干水份,最后在50~60℃烘箱中干燥至恒重后进行隐丹参酮和二氢丹参酮I的含量检测。
[0036] 以取消步骤2)中硝酸铈的使用为对照(CK),即,对照中硝酸铈的终浓度为0μM。
[0037] 所得结果如图1所示:
[0038] 结果表明50μM硝酸铈处理隐丹参酮和二氢丹参酮I含量分别达到0.27mg/g和0.87mg/g,而CK中隐丹参酮和二氢丹参酮I含量分别为0.05mg/g和0.24mg/g。
[0039] 因此,本发明与对照相比分别提高了4.93倍和3.71倍。
[0040] 对比例1、将实施例1中硝酸铈的终浓度由50μM分别改成5、20、100、200μM,其余等同于实施例1。
[0041] 所得结果如图1所示。
[0042] 根据图1,我们得知:5、20、100和200μM浓度下的硝酸铈处理效果均不如本发明的50μM浓度的硝酸铈处理效果显著。
[0043] 对比例2-1、将实施例1步骤1)中黑暗培养的时间由18天改成20天,相应的将步骤2)的诱导时间由6天改成4天;其余等同于实施例1。
[0044] 对比例2-2、将实施例1步骤1)中的黑暗培养的时间由18天改成16天,相应的将步骤2)的诱导时间由6天改成8天;其余等同于实施例1。
[0045] 对比例3-1、将硝酸铈改成硝酸镍,浓度保持不变;其余等同于实施例1。
[0046] 对比例3-2、将5硝酸铈改成硫酸硒,浓度保持不变;其余等同于实施例1。
[0047] 将上述对比例2-1~对比例3-2所得的丹参毛状根按照实施例1所述方法进行隐丹参酮和二氢丹参酮I含量的检测,所得结果如下表2所述:
[0048] 表2
[0049] 隐丹参酮(mg/g) 二氢丹参酮I含量(mg/g)
对比例2-1 0.2 0.61
对比例2-2 0.22 0.65
对比例3-1 0.15 0.58
对比例3-2 0.18 0.67
实施例1 0.27 0.87
[0050] 最后,还需要注意的是,以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然,本发明不限于以上实施例,还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形,均应认为是本发明的保护范围。