一种大肠杆菌DNA光修复酶及其构建方法   0    0

本发明公开了一种大肠杆菌DNA光修复酶及其构建方法，所述的酶具有SEQ ID NO:1,所述的氨基酸序列。本发明从现有的WT大肠杆菌中获得DNA光修复酶基因，设计突变引物得到突变的基因片段，连接突变基因片段与pET22b质粒，构建出重组表达质粒pET22b‑A377S；将该重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞，构建出用于突变体酶表达的基因工程菌BL21(DE3)/pET22b‑A377S；在18℃和1mM ITPG条件下获得了较好的表达。表达出的光修复酶活性更加稳定，而且酶的抗氧化效果显著提高。

1.一种大肠杆菌DNA光修复酶，其特征在于：它具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸的序列。

2.一种编码权利要求1所述的大肠杆菌DNA光修复酶的基因，其特征在于：其含有SEQ ID NO:2的核苷酸序列。

3.一种载体，其特征在于：其含有权利要求2所述的核苷酸序列。

4.一种宿主细胞，其特征在于：其含有权利要求2所述的基因或核苷酸序列，或者含有权利要求3所述的载体。

5.权利要求1所述的一种大肠杆菌DNA光修复酶的构建方法，包括以下步骤：从大肠杆菌(Escherichia coli)中获得DNA光修复酶基因，设计突变引物得到突变基因的片段，连接突变基因片段与pET22b质粒，构建重组表达质粒pET22b-A377S；该重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞，构建用于突变体酶表达的基因工程菌BL21(DE3)/pET22b-A377S；
所述的377位的突变引物为：
L:5′-GGTGATTTGGCAAGCAATAAC-3′
R:5′-TATTGCTTGCCAAATCACCA-3′。