[0005] 本发明的目的是提供一种复配的杀虫组合物及含有该组合物的杀虫剂，该杀虫组合物或杀虫剂以两种微生物为活性成分，两种微生物分别为真菌孢子和细菌，其中真菌孢子为绿僵菌孢子(比如金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)大孢变种EB0732)，细菌为沙雷氏菌(比如粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)EB0732)。
[0006] 本发明中发明人以特定的浓度将绿僵菌孢子和沙雷氏菌进行复配用于防治咀嚼式口器昆虫，尤其对蜚蠊目昆虫(比如蟑螂、小蠊等)具有特别卓越的防治效果。这种效果体现在相对于绿僵菌孢子或沙雷氏菌单剂而言，其效果是增效的，即具有“1+1＞2”的效果，并且半数致死时间显著缩短，缩短程度最高可缩短近7倍，20天内的实际杀虫率(以死亡为准)可大于76％，相较于单剂绿僵菌孢子或沙雷氏菌，提升效果显著；并且本发明的生物杀虫剂可实现长期、持续、连锁、二次杀虫(尤其灭蟑)的效果。
[0007] 本发明所述的增效作用通过采用孙云沛的共毒因子法进行分析确定，其计算公式为：
[0008] 其计算公式为：
[0009]
[0010] 其中，LD50(A剂)为A成分的半数致死剂量；LD50(B剂)为成分B的半数致死剂量；LD50(混剂)为成分A和成分B的混剂的半数致死剂量；PA为成分A在混剂有效成分中所占质量比例；PB为成分B在混剂有效成分中所占质量比例。
[0011] 判断标准：共毒系数当CTC≤80时，组合物表现为拮抗作用；当80＜CTC＜120时，组合物表现为相加作用；当CTC≥120时，则组合物表现为增效作用。
[0012] 具体地，本发明是通过如下技术方案实现的：
[0013] 在本发明的第一方面，本发明提供了一种杀虫组合物，其以两种微生物为活性成分或由两种微生物复配组成，所述两种微生物为真菌孢子和细菌，其中，真菌孢子为绿僵菌孢子，细菌为沙雷氏菌。
[0014] 在本发明的一些实施方式中，所述真菌孢子为金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)大孢变种EB0732，分离自染病的德国小蠊虫尸，该菌株已于2016年10月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13170。该菌株已在本发明申请人的专利CN201611044989.1、发明名称为“一种用于蟑螂生物防治的病原真菌”中公开。
[0015] 在本发明的一些实施方式中，所述细菌为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)EB0732，其分离自野外采集的地鳖虫虫尸，该菌株的GenBank登录号为MH780739。
[0016] 常规操作中，以纯生物复配的方式防治昆虫往往因致死率较低、效果不佳而不被选择，因此，目前使用的杀虫剂往往是化学成分为主，或者是化学成分配合多种植物提取物，再者，即便使用微生物源成分，为了保证杀虫效果其组成中也必然加入化学成分，比如拟除虫菊酯类物质例如胺菊酯、炔咪菊酯、氯氰菊酯等以及硼酸等。
[0017] 然而，本发明中以特定的浓度将绿僵菌孢子和沙雷氏菌进行复配用于防治咀嚼式口器昆虫，尤其对蜚蠊目昆虫(比如蟑螂、小蠊等)具有特别卓越的防治效果。这种效果体现在相对于绿僵菌孢子或沙雷氏菌单剂而言，其效果是增效的，即具有“1+1＞2”的效果，并且半数致死时间显著缩短，缩短程度最高可缩短近7倍，20天内的实际杀虫率(以死亡为准)可大于76％，相较于单剂绿僵菌孢子或沙雷氏菌，提升效果显著；并且本发明的生物杀虫剂可实现长期、持续、连锁、二次杀虫(尤其灭蟑)的效果。
[0018] 在本发明的一些实施方式中，本发明所述的绿僵菌孢子为绿僵菌孢子悬液(比如6 10
以无菌水制备)，悬液中孢子的浓度为1×10‑1×10 CFU/mL。
[0019] 在本发明的实施方式中，在1×106‑1×109CFU/mL的范围内，绿僵菌孢子的浓度可6 7 8 9
以为1×10CFU/mL、1×10CFU/mL、1×10CFU/mL、1×10CFU/mL，也可以为上述任意两个浓
6 9
度组成的范围或所组成的范围间的任意浓度。比如，孢子浓度可以为1×10 ～1×10 CFU/
6 8 6 7 7 9 7
mL、1×10 ～1×10CFU/mL、1×10 ～1×10CFU/mL、1×10～1×10 CFU/mL、1×10～1×
8 8 9
10CFU/mL、1×10～1×10CFU/mL。
[0020] 在较为优选的实施方式中，绿僵菌孢子的浓度为1×107～1×109CFU/mL，优选为18 9 9
×10～1×10CFU/mL，更优选为1×10CFU/mL。
[0021] 在本发明的一些实施方式中，所述沙雷氏菌为沙雷氏菌悬液(比如以无菌水制7 9
备)，悬液中沙雷氏菌的浓度为1×10‑1×10CFU/mL。
[0022] 在本发明的实施方式中，在1×107‑1×1010CFU/mL的范围内，沙雷氏菌的浓度可以7 8 9
为1×10 CFU/mL、1×10 CFU/mL、1×10 CFU/mL。也可以为上述任意两个浓度组成的范围或
7 9 7
所组成的范围间的任意浓度。比如，沙雷氏菌的浓度可以为1×10 ～1×10 CFU/mL、1×10
8 8 9
～1×10CFU/mL、1×10～1×10CFU/mL。
[0023] 在较为优选的实施方式中，沙雷氏菌的浓度为1×108‑1×109CFU/mL，更优选为1×9
10CFU/mL。
[0024] 在本发明的一些实施方式中，本发明所述组合物中，绿僵菌孢子以1×107～1×9 8 9
10CFU/mL的浓度与浓度为1×10‑1×10 CFU/mL的沙雷氏菌复配时，组合物表现出增效的效果，其共毒系数在120以上。
[0025] 在这样的复配方式中，绿僵菌孢子的浓度与沙雷氏菌的浓度可以在其浓度范围内以任意浓度进行复配，这些浓度可以如上文中所述，举例而言，比如绿僵菌孢子以1×9 9 9
10CFU/mL的浓度与浓度为1×10CFU/mL的沙雷氏菌复配，或者绿僵菌孢子以1×10CFU/mL
8 8
的浓度与浓度为1×10CFU/mL的沙雷氏菌复配，或者绿僵菌孢子以1×10CFU/mL的浓度与
9 8
浓度为1×10CFU/mL的沙雷氏菌复配，或者绿僵菌孢子以1×10CFU/mL的浓度与浓度为1×
8
10CFU/mL的沙雷氏菌复配等等。
[0026] 在本发明的一些实施方式中，所述组合物中，沙雷氏菌以1×108‑1×109CFU/mL的8 9
浓度与绿僵菌孢子以1×10‑1×10CFU/mL的浓度复配时组合物表现出较好的杀灭效果，组合物的共毒系数在140以上，半数致死时间小于16天，20天内的致死率在60％以上；在又一
9 8 9
些实施方式中，所述组合物中，沙雷氏菌以1×10CFU/mL的浓度与1×10‑1×10 CFU/mL浓度的绿僵菌孢子复配时组合物表现出更好的杀灭效果，组合物的半数致死时间可显著缩短到14天以下，20天内的致死率超过66％，能够显著缩短起效时间并提升致死率。
[0027] 本发明强调特定的浓度配比在于，虽然两种微生物复配具有杀虫作用，然而，当其以不同浓度组合时，所体现出的防治效果具有差异，比如，在一些实施方式中，绿僵菌孢子5 9
以1×10CFU/mL的浓度与1×10CFU/mL沙雷氏菌复配组合，组合物的共毒系数是小于80的，表现出了拮抗效果，组合物在20天内的杀虫致死率仅有20％，半数致死时间为62.6天；以
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及，比如在又一些实施方式中，绿僵菌孢子以1×10CFU/mL的浓度与1×10CFU/mL沙雷氏菌复配组合，组合物的共毒系数是大于80小于120的，表现出了相加的作用效果，组合物在20天内的杀虫致死率有所提高，半数致死时间也缩短到了38天左右。
[0028] 本发明中所述杀虫组合物可以以任意方便施用且不影响稳定性及成分有效性的形式将上述两种有效成分绿僵菌孢子和沙雷氏菌混合使用，比如在本发明的一些实施方式中，所述杀虫组合物的制备方式为：将绿僵菌孢子与沙雷氏菌分别制备成相应浓度的无菌水悬液后混合均匀。
[0029] 在本发明的第二方面，本发明提供了一种复配生物杀虫剂，其由主剂和辅剂组成，其中主剂在杀虫剂中的含量为不少于0.03wt％，其余为辅剂，所述主剂为如上所述的杀虫组合物。
[0030] 在本发明的一些实施方式中，所述主剂在杀虫剂中的含量为0.037wt％‑0.353wt％。
[0031] 在本发明的一些较为具体的实施方式中，所述主剂具有下表所示的组成：
[0032]
[0033] 在本发明的一些实施方式中，所述辅剂由溶剂和辅料组成，其中，所述辅料选自小鼠全价饲料和红糖，或者与此类似的物质。
[0034] 在本发明的一些实施方式中，所述溶剂为不饱和脂肪酸，优选选自油酸和亚油酸。使用时优选为熟的油酸，比如所述油酸经加热处理，油温70‑100℃，比如85℃。
[0035] 本发明的辅剂中，溶剂与辅料的用量以混匀便于磨碎为宜，其用量为辅料的质量大于或等于溶剂的用量，比如，在一个具体的实施方式中，溶剂与辅料的重量比为1：2.7。
[0036] 在本发明的第三方面，本发明还提供了上述复配生物杀虫剂的制备方法，其包括将绿僵菌孢子与沙雷氏菌分别制备成无菌水悬液后混合均匀(即该混合方法可得到本发明的杀虫组合物)，然后将该混合液混匀进辅剂中压制成粉末即得。其中，辅剂由辅料和溶剂混合均匀后磨碎制成。
[0037] 以及，在本发明的第四方面，本发明提供了上述杀虫组合物或上述复配生物杀虫剂在防治咀嚼式口器昆虫中的应用；所述咀嚼式口器昆虫为蜚蠊目昆虫和蝗虫；优选地，所述蜚蠊目昆虫为蟑螂，选自德国蟑螂、褐带蟑螂长须皮蠊(Supella longipaloa)、东方蟑螂东方蜚蠊(Blatta orientalis)、烟褐蟑螂烟色大蠊(Periplaneta fuliginosa)、美洲蟑螂美洲大蠊(Periplaneta Americana)、土耳其斯坦蟑螂(Blatta lateralis)、德国小蠊(Blatella germanica)、田野蟑螂(Blatta vaga)等。
[0038] 相同条件下，本发明的杀虫组合物或以本发明的杀虫组合物为主剂的复配生物杀虫剂(主剂为活性部分)能够显著缩短杀虫时间，使试虫(比如德国小蠊)达到半数致死的平均时间比单用沙雷氏菌或绿僵菌孢子所用平均时间都要短，最快可提升6‑7倍。20天内的实际杀虫率(以死亡为准，即死亡率)可超过76％，相较于单剂绿僵菌孢子或沙雷氏菌，其提升分别可达2.35‑10.45倍以及2.16‑4.65倍，提升效果显著，将绿僵菌孢子和沙雷氏菌进行复配的增效作用明显，可以克服单剂反应缓慢和控制时间有限的缺陷。此外，绿僵菌孢子和沙雷氏菌的复配成功实现了昆虫种群内的流行病，并且干预幼虫的生长，使其无法正常羽化，能够实现大面积的连锁灭蟑效应，此外，蟑螂因食用或接触本发明的生物杀虫剂或杀虫组合物死亡后，因蟑螂的食粪食尸行为，可通过二次食入或间接食入产生二次灭蟑效果，防治效果持久。
