[0003] 本发明的目的在于克服现有生物垫料的缺陷，提供一种可以长期使用，分解能力较高的新型复合棉麻杆生物活性垫料以及它的制备方法。
[0004] 本发明的另一目的，还在于提供一种在所述复合棉麻杆生物活性垫料中使用的一种复合微生物菌剂，以及它的制备方法。
[0005] 为了实现上述目的，本发明提供的一种复合微生物菌剂，是由枯草芽孢杆菌和酿酒酵母的混合发酵液吸附到黄豆粉上制成的；所述混合发酵液的有效活菌总数为80-100亿个/ml，其中枯草芽孢杆菌的有效活菌数为70-80％，酿酒酵母的有效活菌数为20-30％；所述混合发酵液与黄豆粉的体积质量比为：(30-40)∶(1-2)。
[0006] 其中，所述混合发酵液与黄豆粉的体积质量比优选为：35∶1。
[0007] 上述混合发酵液与黄豆粉的体积质量比是根据L∶g来推算的。
[0008] 所述复合微生物菌剂还可以包括其他载体，如玉米粉或麦麸等。
[0009] 本发明所述的复合微生物菌剂的制备方法，是将酿酒酵母、枯草芽孢杆菌分别进行斜面培养，一级种子培养和二级种子培养，再在发酵罐中进行混合发酵培养后吸附黄豆粉，得到所述复合微生物菌剂。
[0010] 具体地，包括如下步骤：
[0011] 1)斜面培养，包括将酿酒酵母、枯草芽孢杆菌原始菌种分别接种于固体培养基上进行培养；
[0012] 2)一级种子培养，包括将步骤1)培养的酿酒酵母、枯草芽孢杆菌各菌种分别接种于培养基上，制得酿酒酵母、枯草芽孢杆菌的一级种子；
[0013] 3)二级种子培养，包括将步骤2)培养的酿酒酵母、枯草芽孢杆菌一级种子分别接种到含培养基的发酵罐中进行培养，制得酿酒酵母、枯草芽孢杆菌的二级种子；
[0014] 4)混合发酵培养，包括将步骤3)培养的酿酒酵母、枯草芽孢杆菌二级种子逐个接种到含培养液的发酵罐中，进行高密度发酵培养后吸附黄豆粉，获得本发明所述复合微生物菌剂。
[0015] 其中，步骤1)斜面培养中，所述酿酒酵母、枯草芽孢杆菌的固体培养基均为：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂18g，加水至1000ml。
[0016] 其中，步骤1)斜面培养中，将酿酒酵母30℃条件下培养3天。
[0017] 其中，步骤1)斜面培养中，将枯草芽孢杆菌37℃条件下培养2天。
[0018] 其中，步骤2)一级种子培养中，所述酿酒酵母的培养基为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠5g，加水至1000ml。
[0019] 其中，步骤2)一级种子培养中，所述枯草芽孢杆菌的培养基为：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂18g，加水至1000ml。
[0020] 其中，步骤2)一级种子培养中，酿酒酵母30℃条件下，150r/min摇床培养3天。
[0021] 其中，步骤2)一级种子培养中，枯草芽孢杆菌37℃条件下静止培养2天。
[0022] 其中，步骤2)一级种子培养中，结束培养时酿酒酵母、枯草芽孢杆菌各菌种悬液光密度(OD600)值均达到4.0，表面菌种生长情况较好。
[0023] 其中，步骤3)二级种子培养中，一级种子的接种量为步骤2)所述液体培养基体积的10％。
[0024] 其中，步骤3)二级种子培养中，发酵罐内酿酒酵母的培养基为胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠5g，加水至1000ml。
[0025] 其中，步骤3)二级种子培养中，发酵罐内枯草芽孢杆菌的培养基为牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂18g，加水至1000ml。
[0026] 其中，步骤3)二级种子培养中，发酵罐内培养液的总体积为60L。
[0027] 其中，步骤3)二级种子培养中，酿酒酵母30℃条件下，搅拌速度为150r/min，通气量为1∶1，培养3天。
[0028] 其中，步骤3)二级种子培养中，枯草芽孢杆菌37℃条件下培养2天。
[0029] 其中，步骤4)混合发酵培养中，二级种子的接种量为步骤3)所述液体培养基体积的15％。
[0030] 其中，步骤4)混合发酵培养中，黄豆粉作为吸附剂加入到发酵罐内的培养液中，培养液各成分和黄豆粉的质量是在它们的总质量基础上进行计算的。酿酒酵母、枯草芽孢杆菌培养液中各成分和黄豆粉的质量百分比为：黄豆粉20％，红糖1-3％，蛋白胨0.1-0.5％和麦麸30％，余量为水。
[0031] 该步骤酿酒酵母、枯草芽孢杆菌的培养液还可以为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠5g，加水至1000ml；同样地，加入黄豆粉的质量为20g。
[0032] 其中，步骤4)混合发酵培养中，发酵罐内的培养液总体积为600-700L。
[0033] 其中，步骤4)混合发酵培养中，具体的高密度发酵培养采用分批补料培养方式，其中补料碳源为：葡萄糖、甘油、蔗糖或红糖；氮源为：硫酸铵或蛋白胨。
[0034] 其中，所述补充碳源的质量为5-10g，优选8g。
[0035] 其中，所述补充氮源的质量为1-2g，优选2g。
[0036] 其中，步骤4)混合发酵培养过程包括：a、有氧培养阶段；b、微溶氧和厌氧培养阶段。
[0037] 其中，步骤4)混合发酵培养中，枯草芽孢杆菌二级种子的比例为70-80％，酿酒酵母的二级种子比例为20-30％。
[0038] 上述复合微生物菌剂的制备方法，还可以包括浓缩和喷雾干燥的处理，在混合发酵培养后进行。
[0039] 本发明所述的复合棉麻杆生物活性垫料，包括：棉花杆粉碎物，苎麻杆粉碎物，所述复合微生物菌剂和水。
[0040] 其中，每立方米的复合棉麻杆生物活性垫料中，所述棉花杆粉碎物，苎麻杆粉碎物，水和复合微生物菌剂的质量比为(4-5)∶(3-4)∶1.9∶0.1。
[0041] 其中，所述水可以使用饮用水。
[0042] 其中，所述复合棉麻杆生物活性垫料的厚度为80cm-90cm。
[0043] 一种复合棉麻杆生物活性垫料的制备方法，包括：先按照所述复合微生物菌剂的制备方法得到复合微生物菌剂，再分别加入苎麻杆粉碎物、棉花杆粉碎物和水混合制作而成。
[0044] 其中，复合棉麻杆生物活性垫料的制备过程中，加入的所述苎麻杆粉碎物、棉花杆粉碎物是分别由苎麻杆、棉花杆粉碎得到。加入的各组分的用量同本发明内容所述复合棉麻杆生物活性垫料中的相应限定。加入的水为饮用水即可。
[0045] 本发明采用生物菌种(酿酒酵母和枯草芽孢杆菌)，混合发酵培养时以黄豆粉为主的发酵液料中接种枯草芽孢杆菌、酿酒酵母进行发酵，将混合发酵液吸附黄豆粉并处理后调配成纯菌液贮存。然后再加入苎麻杆粉碎物、棉花杆粉碎物和水混合而成。
[0046] 其制备工艺流程如下：
[0047] 斜面培养→摇床发酵(一级种子培养和二级种子培养)→混合发酵培养→混合发酵液吸附黄豆粉和进行处理(浓缩和喷雾干燥)→调配→灌装→灭菌→贮存→加入苎麻杆粉碎物，棉花杆粉碎物和水。其中，吸附黄豆粉的混合发酵液处理后对加入物料的先后顺序没有要求。
[0048] 选用枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌种作为发酵菌种，先选择不同来源的菌种，通过分离纯化，并对发酵能力进行比较，然后选出宜制作的枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌种。
[0049] 本发明在喷雾干燥后，混合发酵液的保存条件及相关指数为：
[0050] 温度：30℃-37℃；时间：2天-4天；有效活菌总数：80-100亿个/ml，其中枯草芽孢杆菌的为70-80％，酿酒酵母的为20-30％；PH：6.0-7.0；检查：无怪气味，平板培养无任何杂菌。
[0051] 本发明的技术关键点在于：
[0052] 1、采用了新菌剂，即复合微生物菌剂；
[0053] 2、避免了高温下的发酵条件；
[0054] 3、采用了优质的长效原材料；
[0055] 4、使用时间长；
[0056] 5、分解能力强。
[0057] 因此，本发明提供了一种养殖栏舍内可以长期使用的生物发酵活性垫料，其作用有：1、能够有效地分解畜禽的排泄物，2、提高畜禽机体的抵抗力，3、加快畜禽的生长速度，4、能够长时间使用，一般为4-5年，时间和效果都比一般的生物垫料高2-3倍；总体来说，可促进养殖业的可持续发展。
