发明内容
[0003] 为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种小鼠胚胎移植胶及其制备方法，所提供的小鼠胚胎移植胶能够显著提高小鼠胚胎的着床率和发育稳定性，大大提高了小鼠胚胎移植的成功率。
[0004] 本发明的一个目的是提供一种小鼠胚胎移植胶，所述小鼠胚胎移植胶是将孕马血清、绒毛膜促性腺激素、羊膜物质、小鼠血浆、链霉素添加于pH为7.0～7.2、浓度为20mmol/L的HEPES缓冲液中制备所得；
[0005] 每mL的HEPES缓冲液中各物质的添加量如下：孕马血清0.01～0.05μg，绒毛膜促性腺激素100～375单位，链霉素30～50μg，羊膜物质20μL，小鼠血浆8～10μL；
[0006] 所述羊膜物质是通过如下方法制备得到的：
[0007] 以小鼠分娩后的羊膜为原料，经胰蛋白酶联合Triton X‑100的脱细胞处理后，得到脱细胞羊膜，再在液氮冷冻条件下进行高速研磨，并用钴60辐照消毒，得到粒状羊膜；将脐带间充质干细胞接种于所述粒状羊膜上，联合培养5～8h，用生理盐水重悬，即得到所述羊膜物质。
[0008] 优选地，每1mg粒状羊膜上接种1～1.5×105个脐带间充质干细胞。
[0009] 本发明的第二个目的是提供上述小鼠胚胎移植胶的制备方法，包括如下步骤：
[0010] S1：羊膜物质的制备
[0011] 以小鼠分娩后的羊膜为原料，经胰蛋白酶联合Triton X‑100的脱细胞处理后，得到脱细胞羊膜；在液氮冷冻条件下，将得到的脱细胞羊膜进行高速研磨，得到颗粒碎片，并对得到的颗粒碎片用钴60辐照消毒，得到粒状羊膜；按照每1mg粒状羊膜上接种1～1.5×5
10 个脐带间充质干细胞的比例，将脐带间充质干细胞接种于所述粒状羊膜上，联合培养5～8h，得到干细胞‑粒状羊膜混合物，混合物过120μm筛网后用生理盐水重悬得到所述羊膜物质；
[0012] S2：小鼠血浆的制备
[0013] 取小鼠离体的新鲜血液样品，通过离心获得富含血小板的血浆，于4℃保存备用，5天内使用；
[0014] S3：按照比例分别取孕马血清、绒毛膜促性腺激素、羊膜物质、小鼠血浆、链霉素和pH为7.0～7.2、浓度为20mmol/L的HEPES缓冲液，将各物质混合均匀，即得到所述小鼠胚胎移植胶。
[0015] 与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
[0016] (1)本发明提供的小鼠胚胎移植胶不仅能够将胚胎粘附在子宫上，提高胚胎的着床率，还为胚胎着床后的生长提供营养，小鼠胚胎移植胶中的羊膜物质是以小鼠分娩时的羊膜制备而成，含有大量不同的胶原，以及纤维粘连蛋白、层粘连蛋白，附着力好，且生物相容性极佳，而羊膜物质中接种的脐带间充质干细胞，具有强大的抗炎、抗免疫排斥、促增殖功能；小鼠血浆富含多种营养因子，可以促进成纤维细胞分泌胶原，而当小鼠血浆与该羊膜物质混合后，会释放大量的生长因子，促进胚胎细胞的增殖。
[0017] (2)本发明提供的小鼠胚胎移植胶能够很好的将小鼠胚胎移植到小鼠体内后能成凝胶状态，减少小鼠胚胎植入后的流动性；而干细胞在植入部位也会被诱导成为纤维细胞，分泌胶原，弥补被降解的羊膜颗粒，实现植入体内后的缓释功能，大大提高了小鼠胚胎的存活率。
[0018] (3)由于小鼠胚胎移植胶的原料中由小鼠自体物质的存在，生物相容性和抗炎性都很好，通过添加少量链霉素就能实现小鼠胚胎移植过程中的抗菌性，减少抗菌药物对小鼠胚胎发育的影响。
