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一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法 0 0

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申请进展

基本信息

申请人信息

代理人信息

摘要

法律状态

权利要求

说明书

专利申请流程有哪些步骤？

申请

申请号：指国家知识产权局受理一件专利申请时给予该专利申请的一个标示号码。唯一性原则。

申请日：提出专利申请之日。

2013-05-29

申请公布

申请公布指发明专利申请经初步审查合格后，自申请日（或优先权日）起18个月期满时的公布或根据申请人的请求提前进行的公布。

申请公布号：专利申请过程中，在尚未取得专利授权之前，国家专利局《专利公报》公开专利时的编号。

申请公布日：申请公开的日期，即在专利公报上予以公开的日期。

2013-09-25

授权

授权指对发明专利申请经实质审查没有发现驳回理由，授予发明专利权；或对实用新型或外观设计专利申请经初步审查没有发现驳回理由，授予实用新型专利权或外观设计专利权。

2014-06-04

预估到期

发明专利权的期限为二十年，实用新型专利权期限为十年，外观设计专利权期限为十五年，均自申请日起计算。专利届满后法律终止保护。

2033-05-29

基本信息

有效性	有效专利	专利类型	发明专利
申请号	CN201310205446.3	申请日	2013-05-29
公开/公告号	CN103262862B	公开/公告日	2014-06-04
授权日	2014-06-04	预估到期日	2033-05-29
申请年	2013年	公开/公告年	2014年
缴费截止日
分类号	A01N65/08 、A01P3/00	主分类号	A01N65/08
是否联合申请	独立申请	文献类型号	B
独权数量	1	从权数量	2
权利要求数量	3	非专利引证数量	0
引用专利数量	1	被引证专利数量	0
非专利引证
引用专利	CN102388925A	被引证专利
专利权维持	5	专利申请国编码	CN
专利事件		事务标签	公开、实质审查、授权

申请人信息

申请人	湖南农业大学	第一申请人	湖南农业大学
专利权人	湖南农业大学	当前专利权人	湖南农业大学
发明人	廖晓兰、张亚、苏品、黄璜、刘双清、夏日照、仇佳伟、尹维	第一发明人	廖晓兰
地址	湖南省长沙市芙蓉区东湖湖南农业大学	邮编
申请人数量	1	发明人数量	8
申请人所在省	湖南省	申请人所在市	湖南省长沙市

代理人信息

代理机构

专利代理机构是经省专利管理局审核，国家知识产权局批准设立，可以接受委托人的委托，在委托权限范围内以委托人的名义办理专利申请或其他专利事务的服务机构。

长沙正奇专利事务所有限责任公司

代理人

专利代理师是代理他人进行专利申请和办理其他专利事务，取得一定资格的人。

何为、袁颖华

摘要

本发明属于生物农药技术领域，具体提供一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法，该方法以苋菜叶为原料，将其晒干后粉碎，采用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，收集的提取液置入旋转浓缩蒸发仪浓缩至膏状，获得抑菌物质。本方法简单、快捷、操作方便，易推广和应用。

摘要附图

法律状态

序号	法律状态公告日	法律状态	法律状态信息
1	2014-06-04	授权
2	2014-05-07	著录事项变更	发明人由廖晓兰张亚苏品黄璜刘双清夏日照仇佳伟尹伟变更为廖晓兰张亚苏品黄璜刘双清夏日照仇佳伟尹维
3	2013-09-25	实质审查的生效	IPC(主分类): A01N 65/08 专利申请号: 201310205446.3 申请日: 2013.05.29
4	2013-08-28	公开

权利要求

权利要求书是申请文件最核心的部分，是申请人向国家申请保护他的发明创造及划定保护范围的文件。

1.一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法，其特征在于，该方法步骤如下: A、以苋菜叶粉末为原料，采用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，苋菜叶粉末一次性加入，乙酸乙酯分3次加入，每次按Ig苋菜叶粉末加10-20mL乙酸乙酯的比例加入后，于摇床上在20-25°C下以90-120r/min振摇24_36h，过滤，收集滤液，合并3次滤液； B、将所得滤液置入旋转浓缩蒸发仪，浓缩至膏状。

2.如权利要求1所述的一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法，其特征在于，所述苋菜叶粉末是取苋菜叶洗净后晒干至含水量为0.5-3.5%，以8000-12000r/min 的转速粉碎 3_6min 至 100-120 目细粉。

3.如权利要求1所述的一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法，其特征在于，所述步骤B中的浓缩条件为:压力为0.09-0.1MPa、水浴温度为40-43°C、冷凝温度为8-10°C及转速为80`-120r/min。

说明书

技术领域

[0001] 本发明属于生物农药技术领域，具体涉及一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法，更具体地说，是苋菜叶抑菌活性物质的提取方法。

背景技术

[0002] 在农业生产上，防治植物有害生物的化学农药应用十分广泛，如:杀虫剂、杀菌剂、除草剂等。化学农药在保证粮食增产方面起着重要的作用。尽管化学农药具有速效、加工容易、防治有害生物效果明显等优势，但由于其存在污染环境、破坏生态平衡、农药残留、病菌产生抗药性等一系列问题，探索新的防治方法十分必要。

[0003]目前，采用生物防治不仅安全、高效、低毒、无污染，而且可解决化学农药费用高，抗药性等问题，具有广阔的发展前景。植物是生物活性化合物的天然宝库，可产生的次生代谢产物超过40万种，其中的大多数为萜类、碱类、黄酮、酚类等杀虫或杀菌的活性物质。从植物中探寻新的活性物质或新的作用靶标，已成为当前研究的热点。

[0004] 苋菜是苋科苋属的一年生草本植物，其营养十分丰富。最新的研究结果表明:苋菜不仅可作为蔬菜、粮食、饲料等，而且具有抗氧化、抗癌、保护肝脏等医疗作用。近年来，随着觅菜研究的不断深入，发现觅菜提取物对腐生菌，如:沙门菌(Salmonella spp.)、大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、李斯特菌(Listeria monocytogenes)等具有抑制作用。而且其种子提取物中存在抗菌肽,对蒸枝酸腐病菌(Geotrichum candidum)、爺病键刀菌(Fusrium solani)、产黄青霉(Penicilliumchryso-genum)、亮白曲霉(Aspergillus candidus)等也具有抑制作用。目前,有关觅菜抑菌物质对植物病原物的研究报道较少，已有人利用鲜苋菜叶汁液对烟草青枯病菌进行了生物测定，发现具有抑制作用，而且盆栽效果较好。但从苋菜叶中提取抑菌物质的方法未见报道，本发明人基于这一点，进行了苋菜叶抑菌物质的提取方法研究，旨在为开发新的植物源农药提供理论依据。`

发明内容

[0005] 本发明所要解决的技术问题是:针对上述现有技术的不足，提供一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法。

[0006] 为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是:一种对烟草青枯病菌具有抑制作用的植物活性物质的提取方法，该方法步骤如下:

[0007] A、用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，苋菜叶粉末一次性加入，乙酸乙酯分3次加入，每次按Ig苋菜叶粉末加10-20mL乙酸乙酯的比例加入后，于摇床上在20_25°C下以90-120r/min振摇24_36h，过滤，收集滤液，合并3次滤液；

[0008] B、将所得滤液置入旋转浓缩蒸发仪，在0.09-0.1MPa气压、水浴温度为40_43°C和冷凝温度为8-10°C条件下，80-120r/min浓缩至膏状。[0009] 上述苋菜叶粉末是取苋菜叶洗净后晒干至含水量为0.5-3.5%，以8000_12000r/min的转速粉碎3-6min至100-120目细粉。

[0010] 与现有技术相比，本发明具有的优点为:

[0011] 1、提取方法简单、快捷、操作方便，易推广和应用。

[0012] 2、分离方法所需的材料易购买，分离速度快，不污染环境，对人畜安全环保，节省成本，节约资源。

实施方案

[0015] 下面结合具体试验和实施例对本发明的技术方案作进一步说明。

[0016] 本发明所使用的原料苋菜叶可以通过种植或购买，生产技术成熟；原料供应充足，获得途径多样。

[0017] 实施例中用到的病原菌种烟草青枯病菌(Pseudomonas solanacearum)由湖南农业大学植物病理学实验室提供。该菌种的活化:采用接种环刮取3环烟草青枯病菌菌种接入牛肉膏蛋白胨斜面培养基，28°C下培养24-48h。实施例1 [0018] 取苋菜叶洗净后晒干，用高速粉碎机以12000r/min的转速粉碎3min至100-120目细粉，获得苋菜叶粉末。取苋菜叶粉末IOg装入三角瓶中，用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，乙酸乙酯分3次加入，每次加IOOmL后，置三角瓶于摇床上在20°C下以90r/min振摇36h,过滤,收集滤液,合并3次滤液,将滤液装入旋转浓缩蒸发仪，在0.09MPa气压、水浴温度为40-43°C和冷凝温度为8-10°C条件下，80r/min蒸发浓缩至膏状，得黑色提取物。

[0019] 实施例2

[0020] 取觅菜叶洗净后晒干，用高速粉碎机以8000r/min的转速粉碎6min至100-120目细粉，获得苋菜叶粉末。取苋菜叶粉末IOg装入三角瓶中，用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，乙酸乙酯分3次加入，每次加200mL后，置三角瓶于摇床上在25°C下以120r/min振摇24h，过滤，收集滤液，合并3次滤液，将滤液置入旋转浓缩蒸发仪，在0.1MPa气压、水浴温度为40-43°C和冷凝温度为8-10°C条件下，120r/min蒸发浓缩至膏状，得黑色提取物。

[0021] 实施例3

[0022] 取苋菜叶洗净后晒干，用高速粉碎机以10000r/min的转速粉碎5min至100-120目细粉，获得苋菜叶粉末。取苋菜叶粉末IOg装入三角瓶中，用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，乙酸乙酯分3次加入，每次加150mL后，置三角瓶于摇床上在22°C下以IOOr/min振摇32h，过滤，收集滤液，合并3次滤液，将滤液置入旋转浓缩蒸发仪，在0.1MPa气压、水浴温度为40-43°C和冷凝温度为8-10°C条件下，90r/min蒸发浓缩至膏状，得黑色提取物。

[0023] 实施例4

[0024] 取觅菜叶洗净后晒干，用高速粉碎机以11000r/min的转速粉碎4min至100-120目细粉，获得苋菜叶粉末。取苋菜叶粉末IOg装入三角瓶中，用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，乙酸乙酯分3次加入，每次加120mL后，置三角瓶于摇床上在22°C下以120r/min振摇34h，过滤，收集滤液，合并3次滤液，将滤液置入旋转浓缩蒸发仪，在0.095MPa气压、水浴温度为40-43°C和冷凝温度为8-10°C条件下，100r/min蒸发浓缩至膏状，得黑色提取物。

[0025] 实施例5

[0026] 取觅菜叶洗净后晒干，用高速粉碎机以9000r/min的转速粉碎6min至100-120目细粉，获得苋菜叶粉末。取苋菜叶粉末IOg装入三角瓶中，用分析纯乙酸乙酯对苋菜叶粉末进行浸提，乙酸乙酯分3次加入，每次加ISOmL后，置三角瓶于摇床上在25°C下以llOr/min振摇28h，过滤，收集滤液，合并3次滤液，将滤液置入旋转浓缩蒸发仪，在0.1MPa气压、水浴温度为40-43°C和冷凝温度为8-10°C条件下，110r/min蒸发浓缩至膏状，得黑色提取物。

[0027] 实施例6抑菌活性检测

[0028] 取膏状提取物，按每Ig膏状提取物加5-10mL乙酸乙酯的比例进行溶解。采用平皿打孔法，将烟草青枯病菌悬浮液(I X 108cfu/mL) 60 μ L均匀涂布于NA平板，然后在平板两侧打孔(Φ=5πιπι)，其中一孔注入待测溶解膏状物，另一孔注入对照溶剂(乙酸乙酯溶剂)，每孔50 μ L，28°C培养24-48h，每处理3次重复，观察抑菌情况。

[0029] 结果与分析:结合参见图1，乙酸乙酯提取物对烟草青枯病菌具有抑制作用，乙酸乙酯溶剂本身对烟草青枯病菌无抑制作用；经观察，乙酸乙酯提取物对烟草青枯病菌的抑制效果比较稳定，具有开发生物农药的潜力。

附图说明

[0013] 图1是苋菜叶乙酸乙酯提取物的48h抑菌效果图；

[0014] 其中:1代表乙酸乙酯提取物；2代表乙酸乙酯。

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