[0003] 利用人参多糖提取液有机地结合CIK细胞免疫治疗在肿瘤治疗中的强大优势，建立人参多糖促进免疫细胞的大量增殖和提高杀伤力的工艺体系，从而间接改善肿瘤患者的生活质量，延长生存期。本发明目的在于提供最优人参多糖提取液浓度在提高CIK细胞增殖速率、CD3和CD56双阳性和对肿瘤杀伤力方面的应用。
[0004] 本发明提供了一种促进CIK细胞增殖分化的人参多糖，所述人参多糖是采用水提醇沉法从人参中提取得到。
[0005] 本发明提供了一种CIK细胞培养基，包括基础培养基和人参多糖。
[0006] 进一步地，所述人参多糖在培养基中的含量为3～300μg/mL。优选的，所述人参多糖在培养基中的含量为30μg/mL。
[0007] 进一步地，所述基础培养基选自RPM1640培养基、DMEM培养基或MEM 培养基。
[0008] 进一步地，所述培养基中还包括IFN-γ和CD3单抗。
[0009] 本发明提供了一种CIK细胞培养的方法，包括以下步骤：
[0010] (1)制备CIK细胞的出发细胞；
[0011] (2)配制含有人参多糖的培养基，并添加入步骤(1)中的出发细胞，经培养获得CIK细胞。
[0012] 进一步地，所述人参多糖在培养基中的含量为3～300μg/mL。优选的，所述人参多糖在培养基中的含量为30μg/mL。
[0013] 进一步地，所述培养基中还包括IFN-γ和CD3单抗。
[0014] 进一步地，步骤(2)的方法包括37℃，5％CO2培养箱内培养7d，定期更换1/2对应培养液。
[0015] 本发明还提供人参多糖在促CIK细胞增殖分化中的应用。
[0016] 本发明还提供了利用所述制备方法制得的CIK细胞在制备肿瘤治疗药物中的应用。
[0017] 以上所述人参多糖采用经水提醇沉法从人参中提取得到。
[0018] 更进一步的，本发明还提供了一种水提醇沉法提取人参多糖的方法，包括以下步骤：
[0019] (1)取人参，加入10倍重量水，煎煮3次，第1次提取时间为2h，第2次 1.5h，第3次1h。合并煎液，过滤，滤液减压浓缩至原体积的0.1-0.4倍；加入 95％的乙醇使浓缩液含醇量为80％，4℃冷藏静置过夜，将冷藏后的药液用离心机低温离心20-40分钟(离心转速为
4000转/分)、收集沉淀，沉淀低温干燥得人参多糖粗品；
[0020] (2)人参多糖粗品加10倍重量水加热煮沸10-30分钟，降温，过滤，向滤液中加入95％的乙醇使含醇量为80％，4℃冷藏静置过夜，将冷藏后的药液用离心机在4℃下离心20-
40分钟(离心转速为4000转/分)，收集沉淀；
[0021] (3)重复水煮醇沉、冷藏离心过程2-3次，得到人参多糖沉淀；人参多糖沉淀加10倍重量水溶解，药液用冷冻离心机在-20℃冻实后，在4℃下融解离心 20-30分钟(离心转速为4000转/分)，取上清液，上清液重复冻融离心1次后，将上清减压，减压浓缩，在4℃下干燥得到人参多糖精品。
[0022] 本发明的有益效果是：(1)本发明所述的人参多糖与其他化学诱导增殖因子相比，符合细胞培养要求，即对人体无毒副作用，故诱导增殖后的CIK细胞直接可以用于临床试验。(2)与相应的多糖刺激因子相比，本发明所述的多糖提取方法精练，剂型先进，该多糖提取液功效明显，成分明确，质量可控。(3)本发明所述的人参多糖具有明显提高CIK细胞增殖速率的作用，CD3和CD56双阳性显著提高，激活后的细胞杀伤力明显高于对照CIK细胞处理。
