实施方案
[0020] 下面对本发明作进一步地说明。
[0021] 实施例1本发明菌株的制备
[0022] 取从湖南省长沙市湖南省农业科学院周边采集的土样5g装入100mL灭菌的去离–1 –2 –3 –4子水制成菌悬液，接入到5mL灭菌的去离子水中制成菌悬液，分别按10 、10 、10 、10 、–5
10 进行梯度稀释，分别涂布于PDA固体培养基上，30℃恒温培养。待其长成彼此独立的菌落，挑取菌落大、生长较快的单菌落，进一步进行平板划线分离，30℃下培养1-2d，如此反复直至菌种纯化，即可得到本发明菌株。
[0023] 实施例2
[0024] 将本发明菌株YYH101以1%的接种量接入100mL木糖基础培养基的三角瓶中，在30℃、120r/min条件下，经发酵48h后测定发酵液中乙醇的含量和木糖的残余量。
[0025] 其中：
[0026] 乙醇的测定：采用SP-6890型气相色谱测定发酵液中乙醇浓度，色谱柱：PEG-20M色谱柱；载气类型：N2；载气流速：10mL/min；检测器：FID；柱温：80℃，进样器温度：180℃；检测器温度：180℃；进样量：1μL；样品处理：10000r/m，离心10min，取上清液。标准曲线：
使用无水乙醇，配制0.2%、0.4%、0.8%、1.6%标准样品，1.0%、2.0%、3.0%、4.0%和5.0%的标准溶液，在相同条件下进样。
[0027] 木糖的测定：采用离子色谱仪测定发酵液中的残糖浓度，先将发酵液在10000r/m下离心10min，取上清液，然后用超纯水将其浓度稀释到1-10mg/L，再过0.22μm尼龙滤膜，直接进样测定。
[0028] 离子色谱仪测定木糖浓度条件：Carbopac PA20分析柱，脉冲安培检测器，电极：Au电极，Ag-AgCl参比电极，梯度条件l：0-15min，NaOH3mM；15-20min，NaOH3-100mM；30-40min，NaOH100mM，NaOAc100mM；40-42min，NaOH200mM；43-46min，NaOH3mM；自动进样，进样的体积为10μL。
[0029] 实施例3木糖发酵工艺条件的优化
[0030] 以木糖为唯一碳源，分别以最适木糖浓度、发酵温度、发酵时间和转速为影响因3
子，设计四因素三水平的L9（4）正交优化试验(表2)，以发酵液乙醇含量为考察指标，确定发酵的最佳条件。正交试验结果见表3，根据极差值分析，影响本发明菌株发酵性能的关系分别为A＞D＞B＞C，对乙醇生成产生影响的因素从主到次依次为木糖浓度、转速、发酵温度、发酵时间，各因子的最佳组合是A3B1C3D2。因此，最佳发酵条件为：木糖浓度20g/L，温度25℃，发酵时间96h，转速140r/min，乙醇产量可达到7.51g/L，为理论值的81.6%。
[0031] 表2优化发酵条件的正交试验设计表
[0032]
[0033] 表3发酵条件优化的正交试验结果表
[0034]
[0035] 本说明书中提及的本发明菌株培养与发酵所用的培养基如下：
[0036] PDA固体培养基：马铃薯200g/L、蔗糖30g/L、琼脂18g/L。
[0037] 木糖基础培养基：木糖20g、蛋白胨15g、酵母粉10g、NH4SO41g、KH2PO41g、MgSO4·7H2O0.5g、CaCl2·2H2O1g、H2O1000mL。
[0038] 纤维素琼脂培养基：琼脂18g、纤维素20g、蛋白胨15g、酵母粉10g、NH4SO41g、KH2PO41g、MgSO4·7H2O0.5g、CaCl2·2H2O1g、H2O1000mL。
[0039] 最后应说明的是：以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
