[0028] 下面结合附图和实施例对本发明技术方案做进一步详细说明，以下实施例不构成对本发明的限定。
[0029] 异噁唑衍生物作为一类有用的中间体以及它们本身所显示出来的多种药物活性而受到人们的广泛关注。本发明的总体思想是将具有生物活性的糖苷、1,2,3‑三氮唑药效结构、五元异噁唑环巧妙地引入到(E)‑2‑(4‑ 氟亚苄基)‑2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮的分子结构，最终制备出了氟取代阿拉伯糖三氮唑结构螺异噁唑‑吡咯里嗪衍生物，改善药理活性。
[0030] 本发明一种氟取代阿拉伯糖三氮唑结构螺异噁唑‑吡咯里嗪衍生物，其化学结构式如下：
[0031]
[0032] 其中，‑Glu＇为由下式表示的阿拉伯糖基：
[0033]
[0034] 本实施例一种氟取代阿拉伯糖三氮唑结构螺异噁唑‑吡咯里嗪衍生物的制备方法，包括步骤：
[0035] 步骤1、(E)‑2‑(4‑氟亚苄基)‑2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮的合成：将 2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮(化合物1)与4‑氟苯甲醛(化合物2)溶于乙醇中，加入40％NaOH水溶液，75℃‑85℃搅拌3‑4小时，然后用布氏漏斗过滤分离，滤饼水洗后用乙醇重结晶纯化，过滤烘干得到产物(E)‑2‑(4‑ 氟亚苄基)‑2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮(化合物3)；
[0036] 如图1、2所示，图2中化学结构式1为2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮，化学结构式2为4‑氟苯甲醛，经过反应后生成(E)‑2‑(4‑氟亚苄基)‑2,3‑ 二氢吡咯里嗪‑1‑酮，(E)‑2‑(4‑氟亚苄基)‑2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮对应于化学结构式3。
[0037] 本申请所述2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮与4‑氟苯甲醛物质的量之比为1:1，每10mmol 2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮与10mmol 4‑氟苯甲醛，溶于20‑30mL 乙醇中，加入2‑3mL40％NaOH水溶液。
[0038] 本申请的一个实施例，将(E)‑2‑(4‑氟亚苄基)‑2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑ 酮的合成：将10mmol 2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮(化合物1)与10mmol 4‑ 氟苯甲醛(化合物2)溶于20mL乙醇中，加入2mL 40％NaOH水溶液， 75℃搅拌4小时，然后用布氏漏斗过滤分离，滤饼水洗后用乙醇重结晶纯化，过滤烘干得到产物(E)‑2‑(4‑氟亚苄基)‑2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮(化合物3)。
[0039] 在另一个实施例中，将(E)‑2‑(4‑氟亚苄基)‑2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑ 酮的合成：将10mmol 2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮(化合物1)与10mmol 4‑ 氟苯甲醛(化合物2)溶于30mL乙醇中，加入3mL 40％NaOH水溶液，85℃搅拌3小时，然后用布氏漏斗过滤分离，滤饼水洗后用乙醇重结晶纯化，过滤烘干得到产物(E)‑2‑(4‑氟亚苄基)‑2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮(化合物3)。
[0040] 在另一个实施例中，将(E)‑2‑(4‑氟亚苄基)‑2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑ 酮的合成：将10mmol 2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮(化合物1)与10mmol 4‑ 氟苯甲醛(化合物2)溶于20mL乙醇中，加入2mL 40％NaOH水溶液， 80℃搅拌3小时，然后用布氏漏斗过滤分离，滤饼水洗后用乙醇重结晶纯化，过滤烘干得到产物(E)‑2‑(4‑氟亚苄基)‑2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮(化合物3)。
[0041] 本申请将2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮与4‑氟苯甲醛溶于乙醇中，其中乙醇是95％的含水乙醇。乙醇只是反应溶剂，过量存在。乙醇少了2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮与4‑氟苯甲醛溶解不了，多了，溶液摩尔浓度太稀，反应很慢。
[0042] 步骤2、用乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛与盐酸羟胺脱水反应生成乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛肟。
[0043] 本实施例用乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛与盐酸羟胺脱水反应生成乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛肟，包括：
[0044] 将乙酰叠氮阿拉伯糖、2‑炔丙氧基苯甲醛悬浮于二氯甲烷与水的混合溶剂中，升温至40‑44℃，剧烈搅拌下依次加入抗坏血酸钠和CuSO4·5H2O，继续回流反应4‑5小时，停止反应，待化学反应的溶液体系降至室温时，分液，水层用CH2C12萃取两次，合并有机相，无水硫酸钠干燥过夜，抽滤，减压除去溶剂后快速柱层析分离，得乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛；
[0045] 在反应瓶，加入盐酸羟胺和水，磁力搅拌至盐酸羟胺溶清，在搅拌下，加入乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛和无水乙醇，剧烈搅拌2‑3小时，待反应完后，用20％Na2CO3溶液调节反应液的PH值到中性，放置冷却至室温，产生大量白色沉淀，放入冰箱过夜后，减压过滤，室温干燥，得颗粒状的白色晶体乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛肟。
[0046] 在本实施例中，乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛与盐酸羟胺物质的量之比为4:5。
[0047] 例如：
[0048] 将12mmol乙酰叠氮阿拉伯糖、1.60g(10mmo1)2‑炔丙氧基苯甲醛悬浮于100mL(二氯甲烷)：(水)＝1：1的混合溶剂中，升温至40～44℃，剧烈搅拌下依次加入0.2mmol抗坏血酸钠和0.1mmol的CuSO4·5H2O，继续回流反应4‑5小时，停止反应，待化学反应的溶液体系降至室温(20～30℃) 时，分液，水层用CH2C12萃取两次(50mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥过夜，抽滤，减压除去溶剂后快速柱层析分离，得乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛。
[0049] 在250mL的锥形瓶中，加入35.6g(0.5mol)盐酸羟胺和90mL H2O，磁力搅拌至盐酸羟胺溶解(通常采用磁力搅拌仪搅拌)。在搅拌下，称取 (0.4mol)乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛和50mL无水乙醇倒入250mL锥形瓶内，剧烈搅拌3小时。待反应完后，用20％Na2CO3溶液约300mL，调节反应液的PH值到中性，放置冷却至室温，产生大量白色沉淀，放入冰箱过夜后，减压过滤，室温干燥，得颗粒状的白色晶体乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛肟。
[0050] 需要说明的是，本实施例用乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛与盐酸羟胺脱水反应生成乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛肟，已经是比较成熟的技术，这里不再赘述。
[0051] 步骤3、将(E)‑2‑(4‑氟亚苄基)‑2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮(化合物 3)和乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛肟(化合物4)溶于无水乙醇中，加入氯胺T，回流8‑12小时，进行1,3‑偶极环加成反应，导入阿拉伯糖三氮唑和异噁唑结构，用甲醇重结晶，真空干燥得到中间化合物5。
[0052] 本申请(E)‑2‑(4‑氟亚苄基)‑2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮、乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛肟、氯胺T物质的量之比为1:1:1.2。
[0053] 本申请的一个实施例将10mmol(E)‑2‑(4‑氟亚苄基)‑2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮(化合物3)和10mmol乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛肟(化合物 4)溶于无水乙醇30mL中，加入12mmol氯胺T，回流12小时，进行1,3‑ 偶极环加成反应，导入阿拉伯糖三氮唑和异噁唑结构，用甲醇重结晶，得到化合物5((2S,3R,4S,5S)‑2‑(4‑((2‑(4‑(4‑氟苯基)‑1'‑氧‑1'H,3'H,4H 螺环[异噁唑‑5,2'‑吡咯里嗪]‑3‑基)苯氧基)甲基)‑1H‑1,2,3‑三唑‑1‑基) 四氢‑
2H‑吡喃‑3,4,5‑三乙酸酯)。
[0054] 如图2所示，图中化学结构式3为(E)‑2‑(4‑氟亚苄基)‑2,3‑二氢吡咯里嗪‑1‑酮，化学结构式4为乙酰阿拉伯糖三氮唑水杨醛肟，化学结构式5为生成的中间化合物5。
[0055] 步骤4、将化合物5悬浮于甲醇中，冰水冷却至‑5℃‑0℃，氮气保护下缓慢滴加甲醇钠的甲醇溶液，加热至室温继续反应3‑4小时，TLC监测至原料点消失，用732强酸苯乙烯阳离子交换树脂调节体系至中性，过滤，用甲醇洗涤离子交换树脂，滤液减压除去甲醇后得淡黄色固体，柱层析分离得到氟取代阿拉伯糖三氮唑结构螺异噁唑‑吡咯里嗪衍生物4‑(4‑氟苯基) ‑3‑(2‑((1‑((2S,3R,4S,5S)‑3,4,5‑三羟基四氢‑2H‑吡喃‑2‑基)‑1H‑1,2,3‑ 三唑‑4‑基)甲氧基)苯基)‑1'H,3'H,4H螺环[异噁唑‑5,2'‑吡咯里嗪]‑1'‑酮。
[0056] 本申请化合物5与甲醇钠物质的量之比为1:2，柱层析分离采用的洗脱剂中氯仿与甲醇的体积比为20:1。本实施例将5mmol化合物5悬浮于 20mL甲醇中，冰水冷却至0℃，氮气保护下缓慢滴加浓度为1.0mol/L 甲醇钠的甲醇溶液0.6mL，室温继续反应4小时，TLC监测至原料点消失，用732强酸苯乙烯阳离子交换树脂调节体系至中性，过滤，用甲醇洗涤离子交换树脂，滤液减压除去甲醇后得淡黄色固体，柱层析分离[洗脱剂：体积比(氯仿：甲醇＝20：1)]，得到氟取代阿拉伯糖三氮唑结构螺异噁唑‑吡咯里嗪衍生物4‑(4‑氟苯基)‑3‑(2‑((1‑((2S,3R,4S,5S)‑3,4,5‑三羟基四氢‑2H‑吡喃‑2‑基)‑1H‑1,2,3‑三唑‑4‑基)甲氧基)苯基)‑1'H,3'H,4H 螺环[异噁唑‑5,2'‑吡咯里嗪]‑1'‑酮(化合物6)。
[0057] 如图2所示，化学结构式6为生成的氟取代阿拉伯糖三氮唑结构螺异噁唑‑吡咯里嗪衍生物，即化合物6。
[0058] 实验数据如下：氟取代阿拉伯糖三氮唑结构螺异噁唑‑吡咯里嗪衍生物(化合物6)，淡黄色粉末，产率46.7％，熔点m.p.152‑153℃，其核磁氢谱、红外谱图和元素分析数据如下：
[0059] 1H NMR(DMSO‑d6)δ:7.28‑7.49(m,4H,Ar‑H),6.79(dd, J＝2.1,0.8Hz,1H),6.56(dd,J＝4.1,2.3Hz,1H),6.47(s,1H,C＝C‑H),5.82 (d,J＝10.0Hz,1H),5.34(d,J＝10.0Hz,1H),8.40(1H,s),7.62 (1H,d,J＝6.4Hz),7.52～7.53(1H,m),7.35～7.37(1H,m),
7.01 ～7.20(1H,m),5.57(1H,d,J＝9.6Hz),5.26(2H,s),5.22(s, 1H),4.36(1H,t),4.34(d,J＝12.8Hz,1H),4.01(1H,dd,J＝3.2,10.0 Hz),3.88(d,J＝12.8Hz,1H),3.78(1H,t),
3.67～3.68(1H,m),3.44 ～3.46(2H,m)
[0060] IR(KBr)v/cm‑1 3451,3433,2916,1708,1603,1458,1242,1095, 1048,756[0061] m/e:575(100.0％)。
[0062] Anal.calcd.for C29H26FN5O7：C,60.47；H,4.61；N,12.18。
[0063] 本实施例采用MTT法测定化合物6对不同瘤株的体外抑制作用，氟取代阿拉伯糖三氮唑结构螺异噁唑‑吡咯里嗪衍生物的抗肿瘤活性测定结果如下：
[0064] 将化合物6用DMSO溶解稀释，肿瘤细胞HepG2(肝癌细胞)、 A375(黑素瘤细胞)、SW620(人结直肠腺癌细胞)、A549(肺腺癌细胞)、SGC7901(胃癌细胞)、SKOV3(卵巢癌细胞)在96孔板上种入 4000个/200μL/孔，每孔加入化合物2μL，终浓度为12.0μM，6.0μM，3.0μM， 1.5μM，共同于37℃、5％CO2细胞培养箱中孵育72小时，以DMSO(1％) 为空白对照。72小时后，加入终浓度为0.25mg/mL的MTT，置于37℃、 5％CO2细胞培养箱中4小时，之后吸干溶剂，每孔加入100μl DMSO，用酶联免疫仪于570nm处测定吸光度(OD值)，所得数据用于计算IC50值。挑选抑制活性高的化合物，测定不同浓度下的化合物作用时间不同对人肿瘤细胞周期和凋亡的影响。
[0065] 不同浓度的受试化合物用96孔板进行粗筛，根据所得的抑制率，计算IC50值，结果见下表。
[0066] 表1化合物6氟取代阿拉伯糖三氮唑结构螺异噁唑‑吡咯里嗪衍生物对六种肿瘤细胞株的IC50值
[0067]
[0068] 表1
[0069] 在表1中，表示出了氟取代阿拉伯糖三氮唑结构螺异噁唑‑吡咯里嗪衍生物(化合物6)对六种肿瘤细胞株的IC50值，说明化合物6对SW620 (人结直肠腺癌细胞)有较强的肿瘤细胞抑制效果，为其进一步的医药领域应用提供了基础。
[0070] 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其进行限制，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员当可根据本发明作出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。
