[0071] 实施例1
[0072] 一种均相电化学传感器的制备方法，包括以下步骤：
[0073] (1)、为将购买的分别为2.5OD的DNA Aptamer、DNA Trigger、DNA HP1、DNA HP2序列分别溶解在pH为8,浓度为0.01M的MOPS缓冲溶液中分别得到浓度为100μM的DNA Aptamer缓冲溶液、DNA Trigger缓冲溶液、DNA HP1缓冲溶液和浓度为100μM DNA HP2缓冲溶液，在4℃下保存备用；其中DNA Aptamer:5’-CGGGCGTGA-3’，DNA Trigger(f g):5’-TCACGCTA_TATATATATATATATA-3’，DNA HP1(a b c d e):
[0074] 3’-AGTGCGAT_ATATATATATATATAT_CCATGTGTAGTT_ATATATAT_ATATATA T-5’，HP2(d*c*b*a*):3’-ATATATAT_AACTACACATGG_ATATATATATATATAT_CCAT GTGTAGTT-5’；
[0075] (2)、将DNA Aptamer缓冲溶液、DNA Trigger缓冲溶液稀释，然后，将20μL 2μM DNA Aptamer缓冲溶液和16μL 2μM DNA Trigger缓冲溶液混合，在37℃下培养20min，制备成DNA Aptamer-Trigger溶液；
[0076] (3)、将步骤(2)得到的DNA Aptamer-Trigger溶液和7μL莱克多巴胺溶液混合，在37℃下杂交20min得到DNA Trigger的溶液；莱克多巴胺的浓度分别为0,0.001,0.0015,
0.003,0.006,0.01,0.03,0.1,1,1.5,5,10,30,60,90,150,300nM。莱克多巴胺将DNA Aptamer从DNA Aptamer-Trigger上剥夺下来，从而得到DNA Trigger的溶液。
[0077] (4)、将步骤(3)得到DNA Trigger的溶液和40μL 4μΜ DNA HP1缓冲溶液、40μL 4μΜ DNA HP2缓冲溶液混合，在37℃下杂交2h，制备成DNA HP1-HP2溶液；DNA Trigger和DNA *HP1形成双链HP1-T，HP1-T有一段裸露的d段可以与HP2上的d段杂交，逐渐取代Trigger链，HP2进一步与HP1杂交得到DNA HP1-HP2溶液，剥夺下来的DNA Trigger可参与下一次循环；
[0078] (5)、室温下，在步骤(4)得到DNA HP1-HP2溶液中加入抗坏血酸钠培养，10min后加入硫酸铜，培养5min；得到基于双链DNA为模板制备铜纳米粒子。加入的抗坏血酸钠和硫酸铜的浓度分别为6mM和600μM，体积分别为8μL；最终溶液体积为200μL，就制得了大小5nm左右的铜纳米粒子。其中铜纳米粒子的制备：利用抗坏血酸钠还原法，先合成出尺寸均匀的CuNPs，此纳米颗粒具有很好的生物兼容性，能结合多条设计好的探针，因此将制备的纳米颗粒应用于生物传感器的检测具有很好的放大作用。
[0079] (6)、将抛光处理后的裸玻碳电极浸入到3mL含有上述制备的200μL含有铜纳米粒子的溶液和终浓度100mM双氧水的MOPS缓冲溶液中，在室温下，进行循环伏安法检测；得到不同浓度的莱克多巴胺浓度对应的信号强度，如图5B；构建信号强度与莱克多巴胺浓度的线性关系，如图5C，利用此线性关系实现对莱克多巴胺的检测。
[0080] 所述抛光处理后的玻碳电极是指：玻碳极先依次用0.3和0.5mm的铝粉进行抛光处理，再依次放入体积比HNO3:H2O＝1:1溶液、乙醇溶液、超纯水中，进行超声波清洗，超声清洗的时间分别为3～5min。
[0081] 本发明提供的一种均相电化学传感器对莱克多巴胺的检测的应用。
[0082] 具体应用方法为：
[0083] 以上使用的缓冲溶液的pH为7.4。
[0084] 其他条件不变，实验在缓冲溶液的pH为4.1,4.5,5,5.5,6,6.5，7，7.4,7.6，7.8,8,8.5,9,10时都可以进行，但是在7.4时信号增加缓慢，如图4E，选择pH 7.4作为实验优化条件。
[0085] 实施例2
[0086] 选择pH 7.4的缓冲溶液，仅仅改变所有培养温度，其他操作同实施例1；结果如图4F，20～45℃均可以实现本发明，但是实验的培养温度为37℃时，实验的效果最好。
[0087] 实施例3
[0088] 选择pH 7.4的缓冲溶液，培养温度为37℃时，仅仅改变DNA级联放大实验培养时间，结果如图4H，表明DNA级联放大实验培养时间应为2h为最佳时间。
[0089] 利用本发明制备的传感器的检测结果与现有技术相比，检测范围、检测限对比：结果如下表1：
[0090] 表1：
[0091]
[0092]
[0093] 本申请检测范围广，0.001-300nM，检测限为0.3pM，而且，检测方法简单，灵敏度高，稳定性好。
[0094] 实施例4
[0095] 一种均相电化学传感器检测莱克多巴胺的应用，包括以下步骤：
[0096] (1)、将购买的分别为2.5OD的DNA Aptamer、DNA Trigger、DNA HP1、DNA HP2序列分别溶解在pH为7.4，浓度为0.01M的MOPS缓冲溶液中分别得到浓度为100μM的DNA Aptamer、DNA Trigger、DNA HP1缓冲溶液和浓度为100μM DNA HP2缓冲溶液，在4℃下保存备用；其中DNA Aptamer:5’-CGGGCGTGA-3’，DNA Trigger(f g):5’-TCACGCTA_TATATATATATATATA-3’，DNA HP1(a b c d e):
[0097] 3’-AGTGCGAT_ATATATATATATATAT_CCATGTGTAGTT_ATATATAT_ATATATA T-5’，HP2(d*c*b*a*):3’-ATATATAT_AACTACACATGG_ATATATATATATATAT_CCATGTGTAGTT-5’；
[0098] (2)、将20μL 2μM DNA Aptamer缓冲溶液和16μL 2μM DNA Trigger缓冲溶液混合，在37℃下培养20min，制备成DNA Aptamer-Trigger溶液；
[0099] (3)、将步骤(2)得到的DNA Aptamer-Trigger溶液和莱克多巴胺溶液混合，在37℃下杂交20min得到DNA Trigger的溶液；此处的莱克多巴胺通过以下方法获得：5个空白猪尿液各4克，加入100毫升聚丙烯离心管中同时加入适量莱克多巴胺试剂。然后将20毫升乙醇/水＝9/1(体积比)混合液加入离心管中。剧烈摇晃10分钟后，混合液在3000转下离心20分钟。重复提取上清液两次。获得的上清液在旋转蒸发仪中60摄氏度减压蒸干。获得的干的提取物再次溶解于4毫升甲醇中，然后通过0.22微米尼龙过滤器过滤，用20毫升甲醇。最终这些获得的稀释的莱克多巴胺样品分别加入Aptamer-Trigger混合液中培养20分钟。莱克多巴胺的浓度分别为10,50,100,500,1000pM。
[0100] (4)、将步骤(3)得到DNA Trigger的溶液和40μL 4μΜ DNA HP1、40μL 4μΜ DNA HP2缓冲溶液混合，在37℃下杂交2h，制备成DNA HP1-HP2溶液；
[0101] (5)、室温下将步骤(4)得到DNA HP1-HP2溶液，加入抗坏血酸钠培养10min，然后加入硫酸铜培养5min，得到基于双链DNA为模板制备铜纳米粒子，铜纳米粒子大小5nm；抗坏血酸钠和硫酸铜的浓度分别为6mM和600μM，体积各为8μL，最终溶液体积为200μL，其中铜纳米粒子的制备：利用抗坏血酸钠还原法，先合成出尺寸均匀的CuNPs，此纳米颗粒具有很好的生物兼容性，能结合多条设计好的探针，因此将制备的纳米颗粒应用于生物传感器的检测具有很好的放大作用。
[0102] (6)、抛光处理后的玻碳电极浸入到3mL含有上述制备的200μL铜纳米粒子溶液和终浓度100mM双氧水的MOPS缓冲溶液中，在室温下，进行循环伏安法检测，利用实施例1制备得到的莱克多巴胺浓度与电信号的线性关系，得到样品莱克多巴胺的浓度，结果如下表2：
[0103] 表2：猪空白尿液中进行莱克多巴胺实样检测。
[0104]
[0105] 如表2所示，加入的样品莱克多巴胺有良好的回收率，87.4到107.0％，相对标准偏差为5.8到9.4％，证明了我们的方法对于实样检测是可靠并且灵敏的。
