[0030] 以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
[0031] 实施例1 传感器的制备
[0032] (1)将巯基DNA(5μL，0.5μM)和三(2‑羧乙基)膦(TCEP)(1μL，1mM)全称，混合均匀，在37℃下放置60min，滴于干净的裸金电极(Au)表面，蒸馏水缓缓冲洗电极，记为Electrode 1。
[0033] (2)取2μL 3‑吗啉丙磺酸(MOPS)缓冲液(10mM MOPS，150mM NaCl，pH 7.6)、1μL 5×TdT缓冲液、dTTP(1μL，10mM)和TdT(0.25μL，10U/mL)制备TdT反应液，控制总体积为5μL，混合均匀，滴于Electrode 1表面，在37℃下放置1h，蒸馏水缓缓冲洗电极，记为Electrode 2。
[0034] (3)向Electrode 2中电极表面滴加Cu2+(5μL，1mM)，室温孵育15min，蒸馏水缓缓冲洗电极。然后向电极表面滴加抗坏血酸钠溶液(5μL，2mM)，室温反应15min，蒸馏水缓缓冲洗电极，记为Electrode 3，于磷酸缓冲溶液(PBS，0.1M，pH 7.0)中检测电化学响应。
[0035] 检测上述三种修饰电极及金电极于PBS(0.1M，pH7.0)中检测电化学响应，如图1，证明传感器Electrode 3制备成功且有良好的电化学响应。
[0036] 实施例2 TdT检测可行性实验
[0037] 为了证明本发明传感器可以实现对TdT的检测，基于实施例1制备我们的生物传感器。对比有TdT存在和无TdT存在时，所制备的传感器的电化学响应，见图2，有TdT时，传感器在PBS(0.1M，pH 7.0)中电化学响应明显，而无TdT存在时，基本无电化学响应，证明该传感器可用于TdT活性检测。
[0038] 实施例3 不同浓度末端转移酶TdT的检测
[0039] 按上述实施例1的传感器制备步骤，制备电化学生物传感器，用于检测不同浓度TdT，浓度依次为0，0.001，0.002，0.005，0.01，0.02，0.05，0.1，0.2，0.5，1，2U/mL。结果如图3所示，说明随着TdT浓度增大，传感器的电化学响应越来越强，峰电流对TdT的浓度呈良好
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的线性关系，传感器的电流响应对TdT浓度线性相关方程为y＝18.86+6.16lgCTdT，R ＝
0.9895，线性范围为0.001～0.5U/mL，检测限为0.0008U/mL，说明传感器对TdT实现高灵敏度检测。
[0040] 实施例4 传感器对TdT的特异性检测
[0041] 选择性实验中TdT及其他酶的浓度均为0.5U/mL，所用到的其他酶的缩写如下：脲酶(Urease)，乙酰胆碱酯酶(AChE)，尿嘧啶‑DNA糖基化酶(UDG)，组蛋白乙酰化酶(HAT)，蛋白激酶(PKA)，碱性磷酸酶(ALP)。按上述实施例1的传感器制备步骤，用其他相同浓度的酶代替TdT。结果如图4所示，与TdT对比，传感器对其他酶的电化学响应非常小，基本接近空白信号，说明传感器对TdT的检测显示较好的选择性。
[0042] 实施例5 TdT抑制剂焦磷酸钠(PP)的抑制效果检测
[0043] 按上述实施例1的传感器制备步骤，制备Electrode 2时，在TdT反应液中用加入不同浓度的焦磷酸钠(PP)，浓度依次为：0，1，2，5，8，10，20，50，80，100，200，500，800μM。结果如图5所示，得传感器的电流与PP浓度对数的关系，计算得PP对TdT的半抑制浓度IC50为22μM，基本接近空白信号，说明PP对TdT活性具有良好的抑制效果。
[0044] 实施例6 Exo I检测可行性实验
[0045] 为了证明本发明传感器可以实现对Exo I的检测，基于实施例1制备电化学生物传感器，步骤(1)后，取Exo I溶液(5μL，2U/mL)滴涂于电极表面，在室温下孵育60min，再把上述TdT反应液滴加到电极表面，然后如实施例1步骤(1)‑(3)制备传感器，见图6，有Exo I时，传感器在PBS(0.1M，pH 7.0)中基本无电化学响应，而无Exo I存在时，电化学响应明显，证明该传感器可用于Exo I活性检测。
[0046] 实施例7 不同浓度Exo I的检测
[0047] 按上述实施例1的传感器制备步骤，用于检测不同浓度Exo I，浓度依次为：0，0.001，0.002，0.005，0.01，0.02，0.05，0.1，0.2，0.5，1，2U/mL。结果如图7所示，说明随着Exo I浓度增大，传感器的电化学响应越弱，峰电流对Exo I的浓度呈良好的线性关系，传感
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器的电流响应对Exo I浓度线性相关方程为y＝2.34‑6.34lgCExo I，R＝0.9861，线性范围为
0.005～2U/mL，检测限为0.002U/mL，说明传感器对Exo I可实现高灵敏度检测。
[0048] 实施例8 传感器对Exo I的特异性检测
[0049] 选择性实验中Exo I及其他酶的浓度均为2U/mL，所用到的其他酶的缩写如下：脲酶(Urease)，乙酰胆碱酯酶(AChE)，尿嘧啶‑DNA糖基化酶(UDG)，组蛋白乙酰化酶(HAT)，蛋白激酶(PKA)，碱性磷酸酶(ALP)。按上述实施例1的传感器制备步骤，用其他相同浓度的酶代替Exo I。结果如图8所示，与Exo I对比，传感器对其他酶的电化学响应非常小，基本接近空白信号，说明传感器对Exo I的检测显示较好的选择性。
[0050] 实施例9 Exo I抑制剂聚乙二醇(PEG)的抑制效果检测
[0051] 按上述实施例1的传感器制备步骤，在Exo I中用加入不同浓度的聚乙二醇(PEG)，浓度依次为0，10，20，50，80，100，200，500，800，1000，2000，5000，8000μM。结果如图9所示，得传感器的电流与PEG浓度对数的关系，计算得PEG对Exo I的半抑制浓度IC50为311μM，基本接近空白信号，说明PEG对Exo I活性具有良好的抑制效果。
[0052] 当然，上述说明并非对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例。本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明保护范围。
