[0023] 下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明,但本发明并不局限于这些实施方式,任何在本实施例基本精神上的改进或代替,仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。
[0024] 实施例1
[0025] 一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法,包括以下步骤:
[0026] (1)牛肝预处理:去除牛肝上的结缔组织,洗净后剁碎,加入牛肝质量的3%的复合酶1,拌匀放置120min后,加入牛肝质量的8倍的蒸馏水,在85℃下水浴加热10h,得料1;
[0027] 所述的复合酶1,是胰蛋白酶、组织蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶按0.5∶1∶0.2的质量比混合;
[0028] (2)精制:将料1和蛋白沉降剂按1∶0.08~的质量比混合,调节混合料的PH值为4~4.5,在65℃下水浴加热2~4h,得料2;
[0029] 所述的蛋白沉降剂,是将含量为20%的磺基水杨酸溶液和浓度为0.18%的盐水溶液按0.8∶1.2的质量比混合制得;
[0030] (3)除杂:将料2取出,过滤,将滤液与复合酶2按1∶1.2的质量比混合,拌匀静置6~8h,在3300r/min的转速下离心,取上清液,将上清液通过阳离子交换树脂,得料3;
[0031] 所述的复合酶2,是将木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.2∶0.8的质量比混合;
[0032] (4)提取:将料3用超声处理8min后,加入料3质量的3倍的乙醇,待结晶析出后,再用无水乙醇重结晶,烘干即可。
[0033] 实施例2
[0034] 一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法,包括以下步骤:
[0035] (1)牛肝预处理:去除牛肝上的结缔组织,洗净后剁碎,加入牛肝质量的6%的复合酶1,拌匀放置180min后,加入牛肝质量的10倍的蒸馏水,在88℃下水浴加热15h,得料1;
[0036] 所述的复合酶1,是胰蛋白酶、组织蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶按1.2∶1.8∶0.6的质量比混合;
[0037] (2)精制:将料1和蛋白沉降剂按1∶0.12的质量比混合,调节混合料的PH值为4~4.5,在75℃下水浴加热2~4h,得料2;
[0038] 所述的蛋白沉降剂,是将含量为30%的磺基水杨酸溶液和浓度为0.22%的盐水溶液按1.2∶1.8的质量比混合制得;
[0039] (3)除杂:将料2取出,过滤,将滤液与复合酶2按1∶1.5的质量比混合,拌匀静置6~8h,在3800r/min的转速下离心,取上清液,将上清液通过阳离子交换树脂,得料3;
[0040] 所述的复合酶2,是将木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.4∶1.2的质量比混合;
[0041] (4)提取:将料3用超声处理12min后,加入料3质量的4倍的乙醇,待结晶析出后,再用无水乙醇重结晶,烘干即可。
[0042] 实施例3
[0043] 一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法,包括以下步骤:
[0044] (1)牛肝预处理:去除牛肝上的结缔组织,洗净后剁碎,加入牛肝质量的5%的复合酶1,拌匀放置150min后,加入牛肝质量的9倍的蒸馏水,在87℃下水浴加热13h,得料1;
[0045] 所述的复合酶1,是胰蛋白酶、组织蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶按0.8∶1.5∶0.4的质量比混合;
[0046] (2)精制:将料1和蛋白沉降剂按1∶0.1的质量比混合,调节混合料的PH值为4~4.5,在70℃下水浴加热2~4h,得料2;
[0047] 所述的蛋白沉降剂,是将含量为25%的磺基水杨酸溶液和浓度为0.2%的盐水溶液按1∶1.5的质量比混合制得;
[0048] (3)除杂:将料2取出,过滤,将滤液与复合酶2按1∶1.3的质量比混合,拌匀静置6~8h,在3500r/min的转速下离心,取上清液,将上清液通过阳离子交换树脂,得料3;
[0049] 所述的复合酶2,是将木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.3∶1的质量比混合;
[0050] (4)提取:将料3用超声处理10min后,加入料3质量的3.5倍的乙醇,待结晶析出后,再用无水乙醇重结晶,烘干即可。
[0051] 实施例4
[0052] 一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法,包括以下步骤:
[0053] (1)牛肝预处理:去除牛肝上的结缔组织,洗净后剁碎,加入牛肝质量的3%的复合酶1,拌匀放置180min后,加入牛肝质量的8倍的蒸馏水,在88℃下水浴加热10h,得料1;
[0054] 所述的复合酶1,是胰蛋白酶、组织蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶按1.2∶1∶0.6的质量比混合;
[0055] (2)精制:将料1和蛋白沉降剂按1∶0.08的质量比混合,调节混合料的PH值为4.5,在75℃下水浴加热2h,得料2;
[0056] 所述的蛋白沉降剂,是将含量为20%的磺基水杨酸溶液和浓度为0.22%的盐水溶液按1.2∶1.8的质量比混合制得;
[0057] (3)除杂:将料2取出,过滤,将滤液与复合酶2按1∶1.5的质量比混合,拌匀静置6h,在3300r/min的转速下离心,取上清液,将上清液通过阳离子交换树脂,得料3;
[0058] 所述的复合酶2,是将木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.2∶1.2的质量比混合;
[0059] (4)提取:将料3用超声处理8min后,加入料3质量的4倍的乙醇,待结晶析出后,再用无水乙醇重结晶,烘干即可。
[0060] 实施例5
[0061] 一种从牛肝脏中提取牛磺酸的方法,包括以下步骤:
[0062] (1)牛肝预处理:去除牛肝上的结缔组织,洗净后剁碎,加入牛肝质量的5%的复合酶1,拌匀放置120min后,加入牛肝质量的10倍的蒸馏水,在85℃下水浴加热15h,得料1;
[0063] 所述的复合酶1,是胰蛋白酶、组织蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶按0.8∶1∶0.6的质量比混合;
[0064] (2)精制:将料1和蛋白沉降剂按1∶0.08的质量比混合,调节混合料的PH值为4.5,在75℃下水浴加热2~4h,得料2;
[0065] 所述的蛋白沉降剂,是将含量为20%的磺基水杨酸溶液和浓度为0.18%的盐水溶液按1.2∶1.5的质量比混合制得;
[0066] (3)除杂:将料2取出,过滤,将滤液与复合酶2按1∶1.5的质量比混合,拌匀静置8h,在3800r/min的转速下离心,取上清液,将上清液通过阳离子交换树脂,得料3;
[0067] 所述的复合酶2,是将木瓜蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶按0.4∶0.8的质量比混合;
[0068] (4)提取:将料3用超声处理12min后,加入料3质量的3倍的乙醇,待结晶析出后,再用无水乙醇重结晶,烘干即可。
[0069] 实验例
[0070] 分别对本发明对牛磺酸的提取率以及纯度进行统计,以传统对牛磺酸的提取方法作为对照,结果如表1所示:
[0071] 表1
[0072]
[0073]