桦木酸的应用方法   0    0

[0001] 本发明属于家畜饲养的技术领域，具体涉及桦木酸在制备预防和治疗家畜，尤其是断奶仔猪腹泻的制剂的用途。

[0002] 在当前高度集约化养殖中，仔猪腹泻是常见的危害很大的疾病。该病直接导致仔猪成活率下降、生长缓慢、发育停滞而成为僵猪，甚至死亡,影响整个饲养期的生长速度和饲料转化率，最终给养殖业带来重大经济损失。据统计，我国每年因腹泻导致的仔猪死亡占仔猪死亡总数的39.8％。仔猪腹泻的平均发病率为46.5％，死亡率为15％，造成的直接经济损失高达10亿元。仔猪断奶腹泻的原因很多,主要有消化不良、免疫力下降、电解质失衡、肠道致病性大肠杆菌和其他致病菌的侵染以及断奶后营养和环境应激等。长期以来，该病的防治主要依赖于抗生素和化学药物解决，而抗生素的滥用导致耐药性产生、内源感染和二重感染、机体免疫力下降以及食品中的药物残留等给人类健康带来了巨大的威胁。因此，寻找有效的抗生素替代品是亟待解决重要问题。

[0003] 桦木酸属于羽扇豆烷型五环三萜类物质，广泛分布于如鼠李科、桃金娘科和桦木科等多种植物中，其量普遍很低，以白桦树皮量较高。《本草纲目》中记载桦树皮可用于黄疽、乳痈、疥疮等疾病的治疗。早在19世纪，白桦树皮就被美国人放在茶和其他饮料中饮用；白桦树汁被欧洲人称为“天然啤酒”和“森林饮料”。1995年发现桦木酸对黑色素瘤细胞具有极强的选择性细胞毒性，抑制H9淋巴细胞中HIV的复制，其作用范围几乎影响病毒生命周期的每个环节。由于桦木酸具有优越的抗肿瘤和抗HIV活性，引起了人们对桦木酸的广泛研究与关注。随后研究发现，桦木酸具有免疫调节、抗氧化应激、抗炎等多种较强的生物活性，而桦木酸在仔猪腹泻方面的应用鲜见报道。据报道，桦木酸对癌细胞的敏感强度约是正常细胞的10倍，桦木酸剂量高达500mg/kg时，动物没有明显的中毒症状，而且桦木酸广泛来源于自然界的多种植物，说明桦木酸具有安全、不易产生耐药性，不存在药物残留等优点，是理想的抗生素替代品之一。

[0004] 本发明的目的在于提供一种桦木酸在制备预防和治疗家畜，尤其是断奶仔猪腹泻制剂的用途，使用的桦木酸安全、无耐药性、针对性强，能够有效控制断奶仔猪腹泻，同时兼具提高机体的免疫力和生产性能作用，可替代抗生素进行喂食和添加。

[0005] 桦木酸的应用方法，所述的桦木酸用于制备家畜的抗腹泻制剂。所述的抗腹泻制剂还能提高家畜的日增重，降低料肉比。

[0006] 所述的家畜为猪，尤其是断奶仔猪。

[0007] 将所述的桦木酸直接喂食家畜或者添加到家畜的基础日粮中喂食。

[0008] 所述的家畜为猪，尤其是断奶仔猪。

[0009] 将所述的桦木酸添加到断奶仔猪基础日粮中的质量比例为0.1～0.5％。优选0.1-0.2％。

[0010] 所述的桦木酸的制备过程为：从白桦树皮中提取桦木醇，经琼斯试剂氧化制备中间产物桦木酮酸后，用硼氢化钠还原合成桦木酸。

[0011] 采用HPLC测定桦木酸的含量为96.53％。

[0012] 本发明中使用的桦木酸是利用现有的技术路线制备，从白桦树皮中提取桦木醇，经琼斯试剂氧化制备中间产物桦木酮酸后，用硼氢化钠还原合成桦木酸。(参考文献：易金娥，文利新，袁莉芸,Obminska-MrukowiczBozena，袁慧.白桦树中桦木醇的提取与桦木酸合成研究.湖南农业大学学报,2010，36(5):574-580.)

[0013] 本发明具有的优点：

[0014] 本发明采用的桦木酸，具有多种生物学活性，且兼有防病功能，既可防病又可提高动物生产性能，桦木酸不易在动物体内残留，不易产生耐药性，确保畜产品的质量。

[0015] 1.可提高断奶仔猪生长性能：桦木酸添加剂组与对照组(没有添加剂)相比，提高日增重，降低料肉比。

[0016] 2.明显抑制断奶仔猪腹泻：桦木酸添加剂组与对照组(没有添加剂)相比，腹泻率显著降低；

[0017] 3.可促进肠道修复：明显改善断奶仔猪小肠黏膜形态，缓解小肠绒毛萎缩，桦木酸添加剂组显著提高十二指肠的绒毛高度，显著降低隐窝深度，提高绒毛高度与隐窝深度之比。

[0028] 本发明使用的桦木酸属于五环三萜类化合物，来源于白桦树皮，从白桦树皮中提取桦木醇，经琼斯试剂氧化制备中间产物桦木酮酸后，用硼氢化钠还原合成桦木酸。具体制备方法如下：收集白桦木的树皮，经60℃烘干，贮藏在黑暗、干燥处。采用半合成法制备桦木酸。1)从白桦树皮中提取桦木酸：称取白桦树皮粉末，用甲醇70℃加热回流3h，减压干燥，加2moL/L NaOH搅拌，收集下层液，减压蒸干并用乙醚溶解，加适量的水充分摇匀，收集上层液，减压干燥，硅胶柱层析，减压干燥得桦木醇纯品。2)采用桦木酮酸为中间体合成桦木酸的方法：用丙酮溶解桦木醇快速搅拌，冷却至5-10℃后，逐滴加入新制的琼斯试剂(桦木醇︰琼斯试剂＝1︰6)，20℃反应3h，过滤除去墨绿色沉淀，减压蒸干丙酮，残液用乙酸乙酯萃取，水洗，10％NaHCO3洗涤，有机相用无水MgSO4干燥，得淡黄色固体(桦木酮酸粗品)用乙醚溶解，快速柱色谱分离，减压干燥，得桦木酮酸纯品。再用硼氢化钠/四氢呋喃(NaBH4/THF)还原，将所得固体溶于甲醇并煮沸15-20min，冷却重结晶得桦木酸纯品。采用HPLC测定桦木酸的含量为96.53％。

[0029] 本发明通过以下药效学实验证明桦木酸可以用于改善断奶仔猪的腹泻，并提高断奶仔猪的生长性能。

[0030] 实例1：

[0031] 健康雄性KM小鼠30只,4-5w，SPF级，体重(20±2)g，许可证号：(湘)2009-0004,饲料为M02小鼠普通育成料，小鼠和饲料购自湖南斯莱克景达实验动物公司。小鼠置于(22-25)℃，相对湿度为50％～70％的饲养房中，饲养1w后，随机分为3组，即空白对照组(A组)，环磷酰胺组(B组，肠粘膜损伤模型)，桦木酸与环磷酰胺联合组(C组，桦木酸按0.5mg/kg b w给与)。C组将桦木酸混悬于1％的可溶性淀粉中，采用灌胃的方式给药，A组与B组仅灌服
1％的可溶性淀粉，均按20ml/kg bw给与，1/d，连续14d，观察临床表现以及体重变化。最后一次给与1h后造模，B组和C组小鼠腹腔注射环磷酰胺(50mg/kg·bw)，A组注射等体积的灭菌生理盐水。饲养结束，小鼠禁食不禁水12h，脱颈椎处死，取材并进行各项指标检测。

[0032] 1)桦木酸对小鼠体重、胸腺指数和脾指数的影响

[0033] 桦木酸对小鼠体重、胸腺指数和脾指数的影响见表1，与空白对照组相比，环磷酰胺组体重和脾指数有所降低，但差异不显著；但胸腺指数明显降低(P<0.05)，提示环磷酰胺使得正常小鼠免疫功能受到抑制，致使体重有所降低；与环磷酰胺组相比，桦木酸组小鼠的体重、胸腺指数和脾指数都得到一定程度的恢复，且胸腺指数差异显著(P<0.05)，表明桦木酸能改善免疫低下小鼠的免疫功能。

[0034] 表1桦木酸对小鼠体重、胸腺指数和脾指数的影响

[0035]

[0036] 与空白对照组相比，“*”差异显著(P<0.05)；与环磷酰胺组相比，“#”差异显著(P<0.05)。

[0037] 2)桦木酸对小鼠肠道中IL-2和IL-10含量的影响

[0038] Thl/Th2系统保持稳定是机体免疫应答，常用IL-2/IL-10的比值来表示。桦木酸对肠道Thl/Th2影响见表2，与空白对照组相比，环磷酰胺组小鼠肠粘膜IL-2/IL-10比值显著降低(P<0.05)，表明细胞免疫应答受抑制，免疫平衡被打破；与模型组相比，桦木酸组肠道的IL-2/IL-10比值显著升高，提示桦木酸可以通过上调Th1/Th2水平，逆转其漂移状态，从而恢复粘膜平衡。

[0039] 表2桦木酸对小鼠肠道中IL-2和IL-10含量的影响

[0040]

[0041] 与空白对照组相比，“*”差异显著(P<0.05)，“**”差异极显著(P<0.01)；与环磷酰胺组相比，“#”差异显著(P<0.05)，“##”差异极显著(P<0.01)。

[0042] 3)桦木酸对小鼠肠粘膜形态的影响

[0043] 环磷酰胺可造成小肠绒毛高度缩短，绒毛高度/隐窝深度比值下降，见表3，表明小肠消化吸收及抵抗外来物质侵入功能受抑制。桦木酸能改善环磷酰胺造成的肠道机械屏障损伤，有利于维持小肠正常的组织结构及生理机能。

[0044] 表3桦木酸对小鼠肠粘膜形态的影响

[0045]

[0046] 与空白对照组相比，“*”差异显著(P<0.05)，“**”差异极显著(P<0.01)；与环磷酰胺组相比，“#”差异显著(P<0.05)，“##”差异极显著(P<0.01)。

[0047] 4)桦木酸对小鼠肠粘膜SlgA含量的影响

[0048] 小肠黏膜层中分泌型免疫球蛋白A(SlgA)量的变化显示肠道免疫屏障功能的改变。见表4，与对照组相比，环磷酰胺组小鼠肠道SIgA的含量显著降低(P<0.01)，提示环磷酰胺造成小鼠肠粘膜免疫屏障损伤；与环磷酰胺组相比，桦木酸能明显提高SIgA含量(P<0.01)，提示桦木酸对肠粘膜损伤小鼠的SIgA分泌具有改善作用，对肠道免疫屏障起到一定保护作用。

[0049] 表4桦木酸对小鼠肠粘膜SlgA含量的影响

[0050]

[0051] 与空白对照组相比，“**”差异极显著(P<0.01)；与环磷酰胺组相比，“##”差异极显著(P<0.01)。5)桦木酸对小鼠肠道抗氧化功能的影响

[0052] 由表5可知，与空白对照组相比，环磷酰胺组小肠SOD活性显著下降，而MDA含量显著升高(P<0.01)，提示环磷酰胺降低小肠粘膜的抗氧化能力；与环磷酰胺组相比，桦木酸组小肠粘膜SOD活性显著增强，而MDA含量显著降低(P<0.01)，说明桦木酸具有抗氧化能力，能明显缓解由环磷酰胺引起的氧化应激，对肠道起到保护作用。

[0053] 表5桦木酸对小鼠肠道SOD和MDA水平的影响

[0054]

[0055] 与空白对照组相比，“**”差异极显著(P<0.01)；与环磷酰胺组相比，“##”差异极显著(P<0.01)。

[0056] 实例2：

[0057] 饲养试验选择同一保育舍的90头28日龄断奶、体重(8.4±0.72)kg的杜×大×长三元杂交断奶仔猪，随机分为3个实验组，每个实验组3个重复，其中A组为空白对照组(基础日粮，不添加任何药物)，B组为桦木酸组(基础日粮+0.1％桦木酸)；C组为抗生素组(基础日粮+50ppm土霉素+50ppm金霉素)，试验期21d。试验前1周对猪舍进行全面的清洗、消毒，试验前各组驱虫一次，采用封闭式管理模式管理圈舍。分早、中、晚三次集中投喂，以料槽有少量饲料剩余为宜，每天逐步增加。采用自动饮水器自由饮水，及时清理粪便，保持圈舍通风良好。地面保持干燥，每天检查粪便。

[0058] 1)桦木酸对仔猪生长性能的影响

[0059] 从图1和图2可以看出，试验结束时，与空白对照组相比，桦木酸能显著提高60日龄仔猪的净增重和日均增重，对料重比有明显的改善作用(P<0.05)；说明桦木酸能提高仔猪的生产性能，提高饲料转化率。

[0060] 2)桦木酸对仔猪腹泻的影响

[0061] 从图3可以看出，与空白对照组相比，桦木酸能明显降低60日龄仔猪的腹泻率(P<0.05)；说明本发明中桦木酸具有抗腹泻功效，且效果较佳。

[0062] 3)桦木酸对断奶仔猪小肠黏膜形态的影响

[0063] 从图4和图5可以看出，与空白对照组相比，桦木酸能明显上调绒毛高度度/隐窝深度比，说明桦木酸能提高小肠的消化吸收及抵抗外来物质侵入功能，有利于维持小肠正常的组织结构及生理机能。

[0064] 实例3：

[0065] 饲养试验选择同一保育舍的90头21日龄断奶、体重(5.73±0.41)kg的杜×大×长三元杂交断奶仔猪，随机分为3个实验组，每个实验组3个重复，其中A组为空白对照组(基础日粮，不添加任何药物)，B组为桦木酸组(基础日粮+0.2％桦木酸)；C组为抗生素组(基础日粮+50ppm土霉素+50ppm金霉素)，试验期28d。试验前1周对猪舍进行全面的清洗、消毒，试验前各组驱虫一次，采用封闭式管理模式管理圈舍。分早、中、晚三次集中投喂，以料槽有少量饲料剩余为宜，每天逐步增加。采用自动饮水器自由饮水，及时清理粪便，保持圈舍通风良好。地面保持干燥，每天检查粪便。

[0066] 试验结果与实例2的功效评价试验结果无明显差别，故在此不做敷述。

[0067] 以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。

[0018] 图1为桦木酸对断奶仔猪生长性能的影响；

[0019] 与空白对照组相比，“*”差异显著(P<0.05)；

[0020] 图2为桦木酸对断奶仔猪料重比的影响；

[0021] 与空白对照组相比，“*”差异显著(P<0.05)，“**”差异极显著(P<0.01)；

[0022] 图3为桦木酸对仔猪腹泻率的影响；

[0023] 与空白对照组相比，“**”差异极显著(P<0.01)；

[0024] 图4为桦木酸对断奶仔猪小肠黏膜绒毛高度和隐窝深度的影响；

[0025] 与空白对照组相比，“*”差异显著(P<0.05)；

[0026] 图5为桦木酸对断奶仔猪小肠黏膜绒毛高度和隐窝深度比值的影响。

[0027] 与空白对照组相比，“**”差异极显著(P<0.01)。