[0006] 本发明旨在为4‑羟基香豆素（4‑HC）及其同分异构体7‑羟基香豆素（7‑HC）提供一种新颖且方便快捷的区分方法，即应用[CuL](ClO4)2催化的非线性化学振荡体系对4‑羟基香豆素（4‑HC）及其同分异构体7‑羟基香豆素（7‑HC）的区分方法，本区分方法是基于该配合物催化的非线性化学振荡体系对4‑羟基香豆素（4‑HC）及其同分异构体7‑羟基香豆素（7‑HC）的敏锐响应而开发的一种电化学振荡体系法。具体地说，是将相同浓度待区分样品（4‑羟基香豆素（4‑HC）和7‑羟基香豆素（7‑HC）分别加入到两组振荡体系中，根据待区分样品对振荡体系的振荡图谱峰形影响不同，实现对待区分样品的定性分析：加入待区分溶液后，若使得体系的振荡受到抑制，电位下降后缓慢上升，然后经过短而小振荡后完全恢复振荡，并在抑制期内形成向下的宽峰，则所加入的待区分样品为4‑羟基香豆素（4‑HC）；若加入待区分溶液后振荡体系受到抑制，电位下降后快速上升，然后未经过短而小振荡而直接完全恢复振荡，并在抑制期内形成向下的尖峰，则所加入的待区分样品为7‑羟基香豆素（7‑HC），且本发明处理样品时间短，测定条件简单易控制便于推广和应用。
[0007] 本发明解决技术问题，采用如下技术方案：
[0008] 本发明为4‑羟基香豆素（4‑HC）及其同分异构体7‑羟基香豆素（7‑HC）提供了区分方法，其特点在于：
[0009] 以乙醇为溶剂，配制待区分样品的溶液；
[0010] 应用“H2SO4 ‑ NaBrO3‑ [CuL](ClO4)2 ‑苹果酸”非线性化学振荡体系作为区分溶液，记录振荡体系的振荡图谱，任意一个稳定的电位最低点处，向振荡体系中加入待区分样品的溶液，根据待区分样品对振荡体系的振荡图谱峰形的影响不同，实现对待区分样品的定性分析；
[0011] 所述待区分样品为4‑羟基香豆素（4‑HC）和7‑羟基香豆素（7‑HC）；
[0012] 向两组区分溶液（非线性体系）中，分别加入待区分样品（4‑羟基香豆素（4‑HC）和7‑羟基香豆素（7‑HC）的溶液。若待区分样品使体系出现振荡受到抑制，电位下降后缓慢上升，然后经过短而小振荡后完全恢复振荡，并在抑制期内形成向下的宽峰的现象，则待区分样品为4‑羟基香豆素（4‑HC）；若待区分样品使振荡体系出现振荡受到抑制，电位下降后快速上升，然后未经过短而小振荡而直接完全恢复振荡，并在抑制期内形成向下的尖峰的现象，则待区分样品为7‑羟基香豆素（7‑HC）。
[0013] 所述振荡产生的任意一个稳定的电位最低点是指振荡产生的第7 21个电位最低~点中的任意一个。
[0014] 本发明所称的四氮杂十四环二烯铜配合物是5, 7, 7, 12, 14, 14‑六甲基‑1, 4, 8, 11‑四氮杂十四‑4, 11‑二烯为配体的四氮杂大环铜( )配合物，结构式如式（Ⅱ）所示，并记作[CuL](ClO4)2，L即为5,7,7,12,14,14‑六甲基‑1,4,8,11‑四氮杂十四‑4,11‑二烯；
[0015] （Ⅱ）
[0016] 本配合物的结构与生命体内肌红蛋白、血红蛋白、叶绿素以及一些金属酶的关键结构卟啉环很相似，这种以[CuL](ClO4)2催化的化学振荡反应与植物和动物细胞内的生化振荡类似。所以，该体系具有稳定的振幅、较长的振荡寿命及对4‑羟基香豆素（4‑HC）和7‑羟基香豆素（7‑HC）的敏锐响应。
[0017] [CuL](ClO4)2的制备分两步：1) 制备L·2HClO4； 2) 由L·2HClO4制备[CuL](ClO4)2。
[0018] 1) 制备L·2HClO4：
[0019] 将98.5mL乙二胺装入一只500mL三颈瓶中，在冰浴条件下，120分钟内搅拌下缓慢滴加 126mL70%高氯酸。最初的反应剧烈并伴有白烟产生，所以滴加速度控制在每5秒钟l滴。随着反应进行可以适当加快滴加速度，直到滴加完为止，得到透明的溶液。仍然在冰水浴的条件下，向该透明溶液加入224mL无水丙酮并剧烈搅拌，溶液很快变浑浊同时形成非常粘稠混合物。仍然在冰水浴的条件下保持2‑3小时以便充分反应。将所得产物转移到布氏漏斗进行抽滤分离，并用丙酮充分洗涤，可得纯白色固体。将此纯自色固体在热的甲醇‑水溶液中重结晶，用硅胶干燥剂真空干燥，得 80g白色晶体，此白色晶体为L·2HClO4。
[0020] 参考文献：
[0021] 1.Curtis, N. F. and Hay, R. W. , J. Chem. Soc. , Chem. Commun. , 1966, p. 534.
[0022] 2.Gang Hu, Panpan Chen, Wei Wang, Lin Hu, Jimei Song, Lingguang Qiu, Juan Song, E1ectrochimica Acta, 2007, Vol. 52, pp. 7996‑8002.
[0023] 3. Lin Hu, Gang Hu, Han‑Hong Xu, J. Ana1. Chem. , 2006, Vol. 61, NO. 10, pp. 1021‑1025.
[0024] 4.胡刚, 中国科学技术大学博士论文, p25‑27，合肥，2005年。
[0025] 2) 由L·2HClO4制备[CuL](ClO4)2：
[0026] 分别加入19.5g Cu(AC)24H2O与21g的L·2HClO4置于1000ml的三颈烧瓶中，再加入500ml的甲醇。热水浴加热回流3‑4小时后，出现红色沉淀。将红色沉淀过滤，滤液在热水浴上浓缩至原体积的1/2‑1/3,放置过夜。充分结晶后，可以得到红色晶体。将红色晶体转移至布氏漏斗用乙醇洗涤，在热的乙醇‑水溶液中重结晶，真空干燥，可得约9g[CuL](ClO4)2红色晶体。
[0027] 参考文献：
[0028] 1. 胡刚，中国科学技术大学博士论文，合肥，2005年。
[0029] 2. D.A.House and N.F.Curtis,Transition meal complexes with alipatic Schiff bases.V.copper（Ⅱ）nickel（Ⅱ）complexes of 1,3‑Propanediamine and their reaction with acetone[J] J.Amer.Chem.Soc.,1964,86;223‑225.
[0030] 本区分方法与现有技术的区别在于，本发明应用“H2SO4 ‑NaBrO3‑ [CuL](ClO4)2 ‑苹果酸”非线性化学振荡体系作为区分溶液，以4‑羟基香豆素（4‑HC）及其同分异构体7‑羟基香豆素（7‑HC）对该区分溶液的振荡图谱峰形影响不同，实现对4‑羟基香豆素（4‑HC）及其同分异构体7‑羟基香豆素（7‑HC）区分。
[0031] 4‑羟基香豆素（4‑HC）及其同分异构体7‑羟基香豆素（7‑HC），在区分溶液（非线性‑5 ‑4振荡体系）中的可检测的浓度范围为9×10 ‑2.7×10 mol/L。
[0032] 上述待区分溶液可区分的浓度范围是经实验确定的最优浓度范围。在该浓度范围内，4‑羟基香豆（4‑HC）和7‑羟基香豆素（7‑HC）对该区分溶液产生的影响差异十分明显，易于观察分析，容易实现区分。另外，区分溶液（振荡体系）中各组分的浓度范围如表1所示，经过多次实验得到的区分溶液（振荡体系）的最佳溶液如表2所示：
[0033] 表1：振荡体系中各组分的浓度范围
[0034] 硫酸(mol/L) 溴酸钠(mol/L) [CuL](ClO4)2 (mol/L) 苹果酸(mol/L) 0.94149‑0.951 0.0241875‑0.0483 0.00203745‑0.00294 0.14625‑0.2304 [0035] 表2：振荡体系中各组分的最佳浓度
[0036] 硫酸(mol/L) 溴酸钠(mol/L) [CuL](ClO4)2(mol/) 苹果酸(mol/L) 0.951mol/L 0.0241875mol/L 0.00237875mol/L 0．2158mol/L
[0037] 具体实验步骤如下：
[0038] 1、按表1规定的浓度范围配制区分溶液，将准备好的工作电极(铂电极)和参比电极(甘汞电极)插入溶液中，工作电极的另一端通过放大器(Instrument Amplifier)连接到数据采集器(Go! LINK)再连接至电脑，打开电脑中logger lite程序对采集时间和取样速度进行设置后，迅速点击开始键从而对溶液进行电位监测，得到所采集的E‑t曲线（电位值随时间变化的曲线）即化学电位振荡图谱（此时尚未加入待测试样），以作空白对照。向两组与空白对照实验中的各组分浓度相同的区分溶液中，在振荡产生的任意一个稳定的电位最低点处，分别迅速加入待区分样品的溶液，根据待区分样品对振荡体系的振荡图谱峰形的影响不同，实现对待区分样品的定性分析。即：在向振荡体系中加入待区分样品的溶液后，根据待区分样品是否会使体系受到抑制、出现抑制期，且振荡恢复后出现峰的形状变化不同的现象，实现对待区分样品的定性分析。
[0039] 化学电位振荡图谱的基本参数包括：
[0040] 振荡振幅：在振荡过程中从一个最低电位到下一个最高电位之间的电位差值。
[0041] 振荡周期：在振荡过程中从一个最低（高）电位到下一个最低（高）电位所需时间。
[0042] 最高电位：稳定振荡时体系出现的电位最高点。
[0043] 最低电位：稳定振荡时体系出现的电位最低点。
[0044] 抑制期 (tin)：从加入待测液振荡受到抑制开始，到振荡重新恢复所需时间。
