[0028] 以下通过实施例来进一步阐明本发明。但是应该理解，所述实施例只是举例说明的目的，并不意欲限制本发明的范围和精神。
[0029] 实施例1：
[0030] 紫穗槐用根系修复剂，包括，菌糠提取物和丛枝菌根真菌，其重量比为3‑5:1。
[0031] 其中，菌糠提取物通过如下方法获得：
[0032] 1)按固液比为1:4‑6(g/mL)将红象草加蒸馏水打浆，用两层纱布过滤，滤液中加1‑3％蔗糖，混匀后于30‑40℃下厌氧发酵40‑50h得红象草发酵液；
[0033] 2)按固液比为1:5‑10(g/mL)将菌糠置于浓度为5‑8mol/L的氨水中，在30‑50℃下预处理下处理30‑60min，然后用硫酸调节pH至中性，灭菌；
[0034] 3)按重量比为100:1‑5将预处理后菌糠中加入红象草发酵液，在30‑40℃下发酵10‑20d，然后过滤，滤液离心，上清液干燥得菌糠提取物。
[0035] 植物根系在生长发育过程中，伴随着一系列的生理反应。根系活力反映植物根系吸收与代谢能力的强弱，直接影响植株的抗逆性及地上部茎叶的生长和作物产量。蛋白质是植物细胞中重要的结构与功能物质，可反映植物细胞内蛋白质合成、降解等信息。根系可溶性蛋白主要由根系中参与各种代谢的酶类组成，其含量是根系活性的基础，有助于加强细胞保水能力。植物根系酶活性体现着根系质量的优劣，与地上部分生长发育及品质密切相关，根系SOD、POD和CAT等可有效消除过量的活性氧，维持植物体内的氧化还原平衡，从而保护植物免受氧化损伤破坏。本实施例根系修复剂用菌糠提取物中含有大量的碳水化合物、腐植酸、乳酸、氨基酸、维生素和乳酸菌等多种活性物质，能够改善根系环境，对紫穗槐幼苗根系根瘤和丛枝菌根真菌数量有显著的促进作用，对根系根长、根表面积、根直径、根体积等形态特征指标有促进作用，使得根系更加发达，紫穗槐幼苗更容易成活；本实施例用菌糠提取物还能增强紫穗槐幼苗的根系四氧唑还原强度，提高紫穗槐幼苗的根系活力，有利于提高根系对矿质营养和水分的吸收能力；本实施例用菌糠提取物还能够有效提高紫穗槐幼苗根系可溶性蛋白含量，增加细胞液浓度，降低渗透势，进而缓解逆境对紫穗槐幼苗生长的影响；本实施例用菌糠提取物还能提高紫穗槐幼苗根系SOD、POD、CAT等保护酶的活性，有利于紫穗槐幼苗体内ROS的淬灭，减少脂质过氧化产物，平衡活性氧代谢，提高紫穗槐幼苗的抗逆性；此外，还能增加土壤中的有机碳，利于植物生长，提高微生物活性，提高土壤评价参数(SEI)，提高土壤质量，利于修复紫穗槐根系。此外，根系修复剂中的丛枝菌根真菌能够和菌糠提取物发挥增益作用，使得丛枝菌根真菌能快速侵染紫穗槐根系，从而发挥修复紫穗槐根系作用，促进复紫穗槐根系对矿质元素、激素和水分等营养物质的吸收，进而改善紫穗槐的生长状况。
[0036] 由此可知，本实施例根系修复剂能够改善根系环境，提高紫穗槐幼苗根系根瘤和丛枝菌根真菌数量、根系活力、根系可溶性蛋白含量、SOD、POD、CAT等保护酶的活性，促进复紫穗槐根系对矿质元素、激素和水分等营养物质的吸收，进而改善紫穗槐的生长状况，从而发挥修复紫穗槐根系作用；同时，还能提高土壤中的有机碳含量和微生物活性，提高土壤评价参数(SEI)，改善土壤质量，为根系生长提高良好的环境，利于修复紫穗槐根系。
[0037] 本发明菌糠的预处理步骤使木质素主要的醚键发生断裂，从而使木质素大分子碎片化，部分木质素溶解于反应溶液中，且木质素分子上的酸性部分比如含羧基、酚基的片段在碱溶液中电离，能促进木质素的溶解；同时使纤维素膨胀，半纤维素溶解，并削弱纤维素和半纤维素的氢键及皂化半纤维素和木质素分子之间的酯键，从而降低纤维素的结晶度，增加菌糠的疏松性，以增加菌种组合物与纤维素的接触面积，利于菌种加快对有机质的降解，从而加快发酵效率。为了提高菌糠提取物中含有腐植酸、乳酸和有机物的含量，采取的措施还包括：预处理用氨水中含有0.5‑5g/L PEG和30‑60mg/L甘氨酸乙酯盐酸盐，PEG和甘氨酸乙酯盐酸盐的存在能够促进氨水进入菌糠内部，在较低的预处理温度下也能更彻底地破坏纤维素‑木质素‑半纤维素之间的连接，从而进一步加快发酵效率，且使得到的菌糠提取物中含有更多的腐植酸和有机物，尤其是提高菌糠提取物中黄腐酸的含量，此外还能促进红象草发酵液中的乳酸菌分泌更多的乳酸。
[0038] 本实施例还公开紫穗槐用根系修复剂的使用方法，蘸根或根系淋施。紫穗槐幼苗移栽前，将所述根系修复剂加入150‑300重量倍的水中，混合均匀后进行蘸根。紫穗槐幼苗移栽后，将所述根系修复剂加入300‑500重量倍的水中，混合均匀后进行根系淋施。
[0039] 实施例2：
[0040] 紫穗槐用根系修复剂，包括，香菇菌糠提取物和丛枝菌根真菌，其重量比为3:1。
[0041] 其中，香菇菌糠提取物通过如下方法获得：
[0042] 1)将200g红象草加800mL蒸馏水打浆，用两层纱布过滤，滤液中加1％蔗糖，混匀后于33℃下厌氧发酵40h得红象草发酵液；
[0043] 2)将1000g香菇菌糠置于5000mL、浓度为5mol/L的氨水中，在30℃下预处理下处理30min，然后用硫酸调节pH至中性，灭菌；
[0044] 3)将1000g预处理后香菇菌糠中加入10g红象草发酵液，在33℃下发酵10d，然后过滤，滤液离心，上清液干燥得香菇菌糠提取物。
[0045] 实施例3：
[0046] 紫穗槐用根系修复剂，包括，平菇菌糠提取物和丛枝菌根真菌，其重量比为5:1。
[0047] 其中，平菇菌糠提取物通过如下方法获得：
[0048] 1)按固液比为1:6(g/mL)将红象草加蒸馏水打浆，用两层纱布过滤，滤液中加3％蔗糖，混匀后于40℃下厌氧发酵50h得红象草发酵液；
[0049] 2)按固液比为1:10(g/mL)将平菇菌糠置于浓度为8mol/L的氨水中，在50℃下预处理下处理60min，然后用硫酸调节pH至中性，灭菌；
[0050] 3)按重量比为100:5将预处理后平菇菌糠中加入红象草发酵液，在40℃下发酵20d，然后过滤，滤液离心，上清液干燥得平菇菌糠提取物。
[0051] 实施例4：
[0052] 紫穗槐用根系修复剂，包括，猴头菇菌糠提取物和丛枝菌根真菌，其重量比为4:1。
[0053] 其中，猴头菇菌糠提取物通过如下方法获得：
[0054] 1)按固液比为1:5(g/mL)将红象草加蒸馏水打浆，用两层纱布过滤，滤液中加1.8％蔗糖，混匀后于30℃下厌氧发酵48h得红象草发酵液；
[0055] 2)按固液比为1:7.5(g/mL)将猴头菇菌糠置于浓度为6.5mol/L的氨水中，在40℃下预处理下处理40min，然后用硫酸调节pH至中性，灭菌；
[0056] 3)按重量比为100:3.4将预处理后猴头菇菌糠中加入红象草发酵液，在33℃下发酵15d，然后过滤，滤液离心，上清液干燥得猴头菇菌糠提取物。
[0057] 实施例5：
[0058] 紫穗槐用根系修复剂，包括，猴头菇菌糠提取物和丛枝菌根真菌，其重量比为4:1。
[0059] 其中，猴头菇菌糠提取物通过如下方法获得：
[0060] 1)按固液比为1:5(g/mL)将红象草加蒸馏水打浆，用两层纱布过滤，滤液中加1.8％蔗糖，混匀后于30℃下厌氧发酵48h得红象草发酵液；
[0061] 2)按固液比为1:7.5(g/mL)将猴头菇菌糠置于浓度为6.5mol/L的氨水中，氨水中含有2.8g/LPEG和47mg/L甘氨酸乙酯盐酸盐，在40℃下预处理下处理40min，然后用硫酸调节pH至中性，灭菌；
[0062] 3)按重量比为100:3.4将预处理后猴头菇菌糠中加入红象草发酵液，在33℃下发酵15d，然后过滤，滤液离心，上清液干燥得猴头菇菌糠提取物。
[0063] 对比例1：
[0064] 与实施例5的不同之处在于：预处理用氨水中含有47mg/L甘氨酸乙酯盐酸盐。
[0065] 对比例2：
[0066] 与实施例5的不同之处在于：预处理用氨水中含有2.8g/L PEG。
[0067] 试验例1：
[0068] 菌糠提取物中腐植酸和黄腐酸含量的测定
[0069] 腐植酸含量的测定采用焦磷酸钠浸提‑重铬酸钾容量法(GB/T 11957‑2001，煤中腐植酸产率测定方法[S].中国标准出版社，2002)。
[0070] 黄腐酸含量测定采用容量滴定法(杨献红，乔桂芳，段健康.容量滴定法测定黄腐酸含量[J].河南化工，2006，(23)：42～43)。
[0071] 乳酸含量测定采用岛津LC‑20AT型高效液相色谱仪。
[0072] 结果如图1‑3所示，可以看出，实施例5所得菌糠提取物中腐植酸的含高于26％，黄腐酸的含高于2.5％，乳酸含量高于2.1％；实施例5所得菌糠提取物中腐植酸、黄腐酸和乳酸的含量高于实施例2‑4和对比例1‑2，且实施例2‑4和对比例1‑2所得菌糠提取物中腐植酸、黄腐酸和乳酸的含量相当。以上结果说明只有在PEG和甘氨酸乙酯盐酸盐的共同存在下才能够使得到的菌糠提取物中含有更多的腐植酸、黄腐酸和乳酸。
[0073] 试验例2：
[0074] 紫穗槐用根系修复剂的使用效果
[0075] 将根系修复剂加入200重量倍的水中，混合均匀后，将紫穗槐幼苗置于其中进行蘸根处理1d，然后移栽于盆栽基质中，每周淋施2次根系修复剂溶液(根系修复剂加入400重量倍的水)；空白组处理过程中不含根系修复剂；于移栽后3个月、6个月、9个月、12个月采集盆栽中紫穗槐根系，按照如下试验方法进行测定。
[0076] 1.根系活力的测定
[0077] 根系活力的测定采用TTC法：称取根尖样品约0.5g，放入称量皿中，加入0.4％TTC溶液和磷酸缓冲液的等量混合液10mL，把根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1‑3h，此后加入1mol/L硫酸2mL，以停止反应；与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上；取出被染色的根尖，加入5mL的乙酸乙酯进行研磨，提取出TTF，最终研磨至根尖无色，将研磨的所有液体转移至10mL的容量瓶，最后乙酸乙酯定容至10mL，然后在485nm的波长下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出四氮唑还原量。按下列公式计算TTC的还原量(以鲜重计)，求出根活力大小。
[0078] 四氮唑还原强度(mg/g·h)＝四氮唑还原量(mg)/根重(g)×时间(h)；
[0079] 式中：时间为保温培养时间。
[0080] 结果如图4所示，实施例2‑5的四氮唑还原强度远远高于空白组，这说明本发明根系修复剂能增强紫穗槐幼苗的根系四氧唑还原强度，提高紫穗槐幼苗的根系活力，有利于提高根系对矿质营养和水分的吸收能力，紫穗槐幼苗更容易成活；且实施例5的四氮唑还原强度高于实施例2‑4及对比例1‑2，这说明PEG和甘氨酸乙酯盐酸盐的存在制得的菌糠提取物更利于提高紫穗槐幼苗的根系活力。
[0081] 2.根系可溶性蛋白含量的测定
[0082] 可溶性蛋白含量的测定采用考马斯亮蓝染色法：
[0083] (1)标准曲线绘制：取6支具塞试管，按标准加入试剂，摇匀，向各管中加入5mL考马斯亮蓝试剂，5min左右，以0号试管为空白对照，在595nm下比色测定吸光度，以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线；
[0084] (2)样品提取：取鲜样0.2‑0.5g，用蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，3000r/min‑4000r/min离心10min，上清液备用。(3)吸取样品提取液1.0mL(视蛋白质含量适当稀释)，放入试管中(每个样品重复两次)，加入5mL考马斯亮蓝试剂，摇匀，放置2min待反应完成，在
595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查蛋白质含量。
[0085] 计算公式：可溶性蛋白含量(mg/g)＝(C×VT)/(W×VS×1000)(mg/g)；
[0086] 式中：
[0087] C‑查标准曲线值(g)；
[0088] VT‑提取液总体积(mL)；
[0089] W‑样品鲜重(g)；
[0090] VS‑测定时加样量(mL)。
[0091] 结果如图5所示，实施例2‑5的根系可溶性蛋白含量远远高于空白组，这说明本发明根系修复剂有效提高紫穗槐幼苗根系可溶性蛋白含量，增加细胞液浓度，降低渗透势，进而缓解逆境对紫穗槐幼苗生长的影响；且实施例5的根系可溶性蛋白含量高于实施例2‑4及对比例1‑2，这说明PEG和甘氨酸乙酯盐酸盐的存在制得的菌糠提取物更利于缓解逆境对紫穗槐幼苗生长的影响。
[0092] 3.根系超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定
[0093] 采用氮蓝四唑光化还原法：
[0094] (1)酶液制备：取0.2g样品洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6mL 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液(pH 7.8)在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液；
[0095] (2)反应混合液配制：分别取Met溶液162mL、EDTA‑Na2溶液0.6mL、磷酸缓冲液5.4mL，NBT溶液6mL、核黄素溶液6mL，混合后摇匀；
[0096] (3)分别取3mL反应混合液和30μL酶液于试管中；
[0097] (4)将试管置于光照培养箱中在4000lux光照下反应20min，同时做两支对照管，其中1支试管取3mL反应混合液加入30μL PBS(不加酶液)照光后测定作为最大光还原管，另1支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零；
[0098] (5)以不照光的对照管调零后，避光测OD560；
[0099] (6)酶活性计算：SOD活性单位以抑制NBT光化还原50％所需酶量为1个酶活单位(u)；
[0100] SOD总活性＝[(Ack‑AE)×V]/(1/2Ack×W×Vt)(U/g/min)；
[0101] 式中：
[0102] AcK‑光照对照管的的吸光度；
[0103] AE‑样品管的吸光度；
[0104] V‑样品液的总体积(mL)；
[0105] Vt‑测定是样品用量(mL)；
[0106] W‑样品鲜质量(g)；
[0107] 4.根系过氧化物酶(POD)活性的测定
[0108] 采用愈创木酚法测定：
[0109] (1)滤纸将材料表面的水分吸干后称取0.2g放入研钵中，加入适量的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成匀浆，将匀浆全部转入到离心管中，3000r/min离心10min，上清液转入到25mL的容量瓶中，沉淀用5mL磷酸缓冲液在提取2次，上清液并入到容量瓶中，定容至刻度，低温备用；
[0110] (2)2mLH2O2+0.95mL愈创木酚+lmL磷酸缓冲液+0.05mL酶液。用加热煮沸5min的酶液作为对照，反应体系加入酶液后立即置于34℃的恒温水浴中保温3min，酶液加一个测一个，在470nm波长下测定吸光度，每1min记录一次，记录5次；
[0111] POD总活性＝(ΔA470×V0)/(W×Vs×0.01×t)(U/g/min)；
[0112] ΔA470‑5min内吸光度的变化；
[0113] V0‑提取酶液总体积(mL)；
[0114] W‑植物鲜重(g)；
[0115] Vs‑测定时取用酶液体积(mL)；
[0116] t‑反应时间(min)。
[0117] 5.根系过氧化氢酶(CAT)活性的测定：
[0118] (1)酶液制备：取0.2g样品洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6mL 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液(pH 7.8)在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液；
[0119] (2)试剂配制：0.15mol/L磷酸缓冲液(pH 7.0)：取A母液(Na2HPO4)457.5mL和B母液(NaH2PO4)292.5mL混合后用蒸馏水定容至1000mL；(3)反应液配制：取200mL PBS(0.15M，pH 7.0)，加入0.3092mL 30％的H2O2(原液)摇匀即可；
[0120] (4)样品测定：取3mL反应液加入0.1mL酶液，以PBS为对照调零，测定OD240(紫外)(测定40s)；
[0121] (5)酶活性计算：以每min OD值减少0.01为1个酶活性单位(u)；
[0122] CAT＝[ΔA240×V0]/(W×Vs×0.01×t)(U/g/min)；
[0123] 式中：
[0124] ΔA240‑反应时间内吸光度的变化；
[0125] W‑样品鲜重(g)；
[0126] t‑反应时间(min)；
[0127] V0‑提取酶液总体积(mL)；
[0128] Vs‑测定时取用酶液体积(mL)。
[0129] SOD、POD、CAT保护酶的活性结果如图6，实施例2‑5的根系SOD、POD、CAT酶活性远远高于空白组，这说明本发明根系修复剂提高紫穗槐幼苗根系SOD、POD、CAT等保护酶的活性，有利于紫穗槐幼苗体内ROS的淬灭，减少脂质过氧化产物，平衡活性氧代谢，提高紫穗槐幼苗的抗逆性；且实施例5的根系SOD、POD、CAT酶活性高于实施例2‑4及对比例1‑2，这说明PEG和甘氨酸乙酯盐酸盐的存在制得的菌糠提取物更利于缓解逆境对紫穗槐幼苗生长的影响。
[0130] 上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。
[0131] 以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。
