[0019] 以下结合附实施例对本发明作进一步详细描述。
[0020] 实施例：参照图1至图5，石首鱼科HPLC指纹图谱鉴定方法专用处理试剂组合物，该处理试剂组合物包括：
[0021] 提取溶剂：乙酸乙酯；
[0022] 洗脱溶剂A相：乙腈；
[0023] 洗脱溶剂B相：浓度为1%的磷酸水。
[0024] 采用上述试剂组合的进行HPLC指纹图谱鉴定石首鱼科鱼类的种群，由于其能出现较多的检测峰值，能较好的再现石首鱼科鱼类组织化学成分的优点，使得其测试方法具有稳定性好的优点，且避免认为目测、鉴定的识别错误，具有极强的重复性和准确性。
[0025] 为优化上述技术方案，采取的措施还包括：乙腈的浓度为1% 3%，3%，3% 10%，30%~ ~ ~45%，45% 55%，55% 60%，60% 70%，70% 85%，85% 87%，87% 90%，90%-95%，95% 100%，100%。
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[0026] 乙腈的浓度还与HPLC洗脱时间存在如下对应关系：0 5 min，1% 3%；5 8 min，3%；8~ ~ ~10 min，3% 10%；15 20 min，30% 45%；20 23 min， 45% 55%；23 25 min，55% 60%；25 30 ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~
min，60% 70%；30 35 min，70% 85%；35 40 min，85% 87%；40 43 min，87% 90%；43 45 min， ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~
90%-95%；45 47 min，95% 100%；47 60 min，100%。
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[0027] 通过对众多提取物组合或单纯方式进行试验后，发现水、50%甲醇+50%水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯作为溶剂结果较好，但对提取物的影响差异性较大。发明人发现，溶剂极性越大，提取物中含有的大极性物质越多，样品共有峰的峰面积所占总峰面积的比例降低，低于90%，图谱无法达到代表样品整体有效成分的作用。以乙酸乙酯作为提取溶剂时，大极性物质提取率低，峰面积所占比例小，共有峰数量多。因此，优选乙酸乙酯作为提取溶剂。流动相采用乙腈-0.1%磷酸后，有效成分的峰型尖锐，分离度增加，更利于后续的数据分析。因此，本流动相优选确定为乙腈-1%磷酸水。上述结论可以作为经验，指导类似实验的试剂设计。
[0028] 下面结合试剂的特定使用方法进一步说明本发明的技术要点。石首鱼科HPLC指纹图谱鉴定方法采用石首鱼科鱼类肌肉的化学成分HPLC图谱结合石首鱼科鉴定数字方程式组鉴定石首鱼科鱼的产地或物种。采用HPLC指纹图谱鉴定石首鱼科鱼类的种群，具有稳定性好的优点，且避免认为目测、鉴定的识别错误，具有极强的重复性。
[0029] 石首鱼科鱼类肌肉按照物料比1g：100ml的比例添加乙酸乙酯进行提取；提取物采用乙酸乙酯补足失重；将提取物滤去残渣后在40℃以下除去乙酸乙酯，然后加入甲醇溶解残余物，再用0.45μm滤膜微滤后待用。如样品需要干燥保存，根据常识，优选方式应当为真空冷冻干燥。
[0030] 制作HPLC图谱的色谱条件为：
[0031] 色谱柱采用Thermo C18，250 mm×4.6 mm，5 μm；流速为0.5 mL/ min；检测波长为210 nm，进样量为20 μL；柱温为25 ℃；
[0032] 流动相采用A相为乙腈、B相为0.1%磷酸水；
[0033] A相梯度洗脱条件为：0 5 min，1% 3%；5 8 min，3%；8 10 min，3% 10%；15 20 min，~ ~ ~ ~ ~ ~30% 45%；20 23 min， 45% 55%；23 25 min，55% 60%；25 30 min，60% 70%；30 35 min，70%~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~
85%；35 40 min，85% 87%；40 43 min，87% 90%；43 45 min， 90%-95%；45 47 min，95%~ ~ ~ ~ ~ ~ ~
100%；47 60 min，100%。
~
[0034] 石首鱼科鉴定数字方程式组为：
[0035] YZ=25.293X1+967.823X2+407.940X3+101.448X4+59.194X5-123.471X6+1593.172X7+345.458X8-38.876；
[0036] YF=-105.747X1+987.959X2+705.193X3+37.103X4-52.803X5-245.897X6+1451.686X7+1118.618X8-81.642；
[0037] YH=170.568X1+1700.890X2+587.987X3+431.557X4+175.667X5-113.420X6+2405.938X7+191.474X8-234.316；
[0038] YHG=234.779X1+3415.322X2+1452.328X3+946.577X4+365.135X5-325.426X6+2404.938X7+598.140X8-312.921；
[0039] YM=990.890X1+5338.798X2+1156.344X3+848.064X4-268.936X5-325.381X6+1883.674X7+536.360X8-310.757；
[0040] 其中，X1 ~X8依次代表了峰4、峰5、峰7、峰10、峰11、峰12、峰15、峰18的相对峰面积；
[0041] 将待测样品的峰面积带入上述方程中，比较Y值的大小，Y值最大的就是该样品的产地或物种。
[0042] 相对峰的峰编号与保留时间的对应关系如表1。
[0043] 表1：图谱峰编号与保留时间的对应关系
[0044]
[0045] 将各样品18个共有峰的相对峰面积导入SPSS18.0中进行因子分析，共选取出三个主成分，第一主成分（PC1）的贡献率为55.59%，第二主成分的贡献率为18.00%，第三主成分的贡献率为6.77%，累计贡献率达到80.36%（大于80%），可见选取的三个主成分涵盖了样品的大部分信息，可用作后续分析。
[0046] 通过重复验证试验，将结果输入SPSS18.0分析软件中进行交互验证，表2结果表明，仅野生小黄鱼的一个样品发生了错误，交互验证的正确率高达 98.4%。说明判别函数稳定性良好，可用于鉴别不同产地的同种鱼类及相同产地的相近鱼种。
[0047] 表2：交互验证结果
[0048]
[0049] 注：已对交互验证分组案例中的98.4%的样品进行了正确分类。
[0050] 尽管已结合优选的实施例描述了本发明，然其并非用以限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，能够对在这里列出的主题实施各种改变、同等物的置换和修改，因此本发明的保护范围当视所提出的权利要求限定的范围为准。
