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一种生地黄中降糖活性成分的制备方法 0 0

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申请进展

基本信息

申请人信息

代理人信息

摘要

法律状态

权利要求

说明书

专利申请流程有哪些步骤？

申请

申请号：指国家知识产权局受理一件专利申请时给予该专利申请的一个标示号码。唯一性原则。

申请日：提出专利申请之日。

2017-12-27

申请公布

申请公布指发明专利申请经初步审查合格后，自申请日（或优先权日）起18个月期满时的公布或根据申请人的请求提前进行的公布。

申请公布号：专利申请过程中，在尚未取得专利授权之前，国家专利局《专利公报》公开专利时的编号。

申请公布日：申请公开的日期，即在专利公报上予以公开的日期。

2018-06-15

授权

授权指对发明专利申请经实质审查没有发现驳回理由，授予发明专利权；或对实用新型或外观设计专利申请经初步审查没有发现驳回理由，授予实用新型专利权或外观设计专利权。

2019-08-13

预估到期

发明专利权的期限为二十年，实用新型专利权期限为十年，外观设计专利权期限为十五年，均自申请日起计算。专利届满后法律终止保护。

2037-12-27

基本信息

有效性	有效专利	专利类型	发明专利
申请号	CN201711457868.4	申请日	2017-12-27
公开/公告号	CN108059646B	公开/公告日	2019-08-13
授权日	2019-08-13	预估到期日	2037-12-27
申请年	2017年	公开/公告年	2019年
缴费截止日
分类号	C07H1/08 、C07H17/04 、A61K31/7048 、A61P3/10	主分类号	C07H1/08
是否联合申请	独立申请	文献类型号	B
独权数量	1	从权数量	4
权利要求数量	5	非专利引证数量	0
引用专利数量	0	被引证专利数量	0
非专利引证
引用专利		被引证专利
专利权维持	5	专利申请国编码	CN
专利事件		事务标签	公开、实质审查、授权

申请人信息

申请人	扬州工业职业技术学院	第一申请人	扬州工业职业技术学院
专利权人	扬州工业职业技术学院	当前专利权人	扬州工业职业技术学院
发明人	陈秀清、赵真	第一发明人	陈秀清
地址	江苏省扬州市华扬西路199号	邮编	225127
申请人数量	1	发明人数量	2
申请人所在省	江苏省	申请人所在市	江苏省扬州市

代理人信息

代理机构

专利代理机构是经省专利管理局审核，国家知识产权局批准设立，可以接受委托人的委托，在委托权限范围内以委托人的名义办理专利申请或其他专利事务的服务机构。

北京中济纬天专利代理有限公司

代理人

专利代理师是代理他人进行专利申请和办理其他专利事务，取得一定资格的人。

于跃

摘要

本发明涉及一种生地黄中降糖活性成分的制备方法，具体涉及一种同时制备生地黄中两个活性成分式I和式II的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)取生地黄，粉碎至20‑80目后，经超临界CO2萃取得粗提物；(2)将步骤(1)得到的粗提物用2‑3倍质量的乙醇溶解后，通过大孔树脂吸附，用体积分数为50‑70％的乙醇洗脱，收集3‑5倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，再经Sephadex LH‑20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CHCl3/MeOH混合溶剂，收集2‑3倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，经高效液相色谱HPLC制备，得式I和式II两个活性成分。

摘要附图
说明书附图：[0009]
说明书附图：[0020]
说明书附图：[0024]

法律状态

序号	法律状态公告日	法律状态	法律状态信息
1	2019-08-13	授权
2	2018-06-15	实质审查的生效	IPC(主分类): C07H 1/08 专利申请号: 201711457868.4 申请日: 2017.12.27
3	2018-05-22	公开

权利要求

权利要求书是申请文件最核心的部分，是申请人向国家申请保护他的发明创造及划定保护范围的文件。

1.一种同时制备生地黄中两个活性成分式I和式II的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)取生地黄，粉碎至20-80目后，经超临界CO2萃取得粗提物；
(2)将步骤(1)得到的粗提物用2-3倍质量的乙醇溶解后，通过大孔树脂吸附，用体积分数为50-70％的乙醇洗脱，收集3-5倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CHCl3/MeOH混合溶剂，收集2-3倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，经高效液相色谱HPLC制备，得式I和式II两个活性成分；
其中式I和式II两个活性成分的结构如下：
步骤(1)所述的超临界CO2萃取，其萃取压力为20-30 MPa，萃取温度为45-50℃，CO2流量为50-55 L/h，萃取时间为3-5h，分离釜I温度为35-40℃，压力为7-10MPa，分离釜II温度为
30-35℃，压力为5-6 MPa；
步骤(2)所述大孔树脂的型号选自AB-8、D101、HZ818、HPD100中的一种；所述高效液相色谱HPLC制备的色谱条件为：色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝55∶45。

2.一种降血糖药物，其特征在于包含权利要求1制备的式I、式II化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分。

3.权利要求2所述的药物，其特征在于该药物还包括其他预防和/或治疗II型糖尿病的药物。

4.权利要求2-3任一项所述的药物，其特征在于该药物还可包括药学上可接受的辅料。

5.权利要求4所述的药物，其特征在于所述药物的剂型为固体制剂、液体制剂或半固体制剂。

说明书

技术领域

[0001] 本发明属于中药活性成分提取领域，具体涉及一种生地黄中降糖活性成分的制备方法。

背景技术

[0002] 地黄为玄参科植物地黄(Rehmannia glutinosa Libosch.)的新鲜或干燥块根，在《神农本草经》中被列为上品。依照炮制方法在药材上分为：鲜地黄、干地黄与熟地黄，同时其药性和功效也有较大的差异，按照《中华本草》功效分类：鲜地黄为清热凉血药；熟地黄则为补益药。地黄中化学成分主要有低聚糖、多糖、环烯醚萜苷、氨基酸等，它们是地黄药理作用的物质基础。本发明从生地黄中分离得到两个新的糖苷类化合物，其显示出较强的葡萄糖激酶活化作用，并具有一定的降血糖作用。

发明内容

[0003] 本发明提供一种同时制备生地黄中两个活性成分式I和式II的方法，其特征在于包括如下步骤：

[0004] (1)取生地黄，粉碎至20-80目后，经超临界CO2萃取得粗提物；

[0005] (2)将步骤(1)得到的粗提物用2-3倍质量的乙醇溶解后，通过大孔树脂吸附，用体积分数为50-70％的乙醇洗脱，收集3-5倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CHCl3/MeOH混合溶剂，收集2-3倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，经高效液相色谱HPLC制备，得式I和式II两个活性成分；

[0006] 其中式I和式II两个活性成分的结构如下：

[0007]

[0008]

[0009] 步骤(1)所述的超临界CO2萃取，其萃取压力为20-30MPa，萃取温度为45-50℃，CO2流量为50-55L/h，萃取时间为3-5h，分离釜I温度为35-40℃，压力为7-10MPa，分离釜II温度为30-35℃，压力为5-6MPa。

[0010] 步骤(2)所述大孔树脂的型号选自AB-8、D101、HZ818、HPD100中的一种。

[0011] 步骤(2)所述高效液相色谱HPLC制备的色谱条件为：色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝55∶45。

[0012] 本发明的另一实施方案提供一种降血糖药物，其特征在于所述降血糖药物以上述式I、式II化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分。该药物组合物还任选包括其他预防和/或治疗II型糖尿病的药物。该药物组合物还可包括药学上可接受的辅料。所述药物组合物的剂型可以是固体制剂、液体制剂或半固体制剂。

[0013] 本发明的另一实施方案提供上述式I、式II化合物或其药学上可接受的盐在制备降血糖药物中的应用。

[0014] 本发明的另一实施方案提供上述式I、式II化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗由葡萄糖激酶介导的疾病的药物中的应用。

实施方案

[0015] 为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。

[0016] 实施例1

[0017] (1)取生地黄1.0kg，粉碎至20-80目后，经超临界CO2萃取得粗提物45g；其中，萃取压力为20MPa，萃取温度为50℃，CO2流量为50L/h，萃取时间为5h，分离釜I温度为35-40℃，压力为10MPa，分离釜II温度为30-35℃，压力为6MPa。

[0018] (2)将步骤(1)得到的粗提物用2倍质量的乙醇溶解后，通过AB-8型大孔树脂吸附，用体积分数为50％的乙醇洗脱，收集5倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CHCl3/MeOH混合溶剂，收集2倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，经高效液相色谱HPLC制备(色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝55∶45)，依次得到式I(19mg)、式II化合物(36mg)。结构确证数据：

[0019]

[0020] 式I化合物： (c 0.1,MeOH),ESI-MS(m/z)：723.2[M+H]+；式II化合物：(c 0.1,MeOH),ESI-MS(m/z)：765.2[M+H]+；

[0021] 表1 式I、式II化合物的NMR数据(1H/13C NMR 400/100MHz,CD3OD)

[0022]

[0023]

[0024] 实施例2

[0025] (1)取生地黄1.5kg，粉碎至20-80目后，经超临界CO2萃取得粗提物73g；其中，萃取压力为30MPa，萃取温度为45℃，CO2流量为55L/h，萃取时间为3h，分离釜I温度为35-40℃，压力为7MPa，分离釜II温度为30-35℃，压力为5MPa。(2)将步骤(1)得到的粗提物用3倍质量的乙醇溶解后，通过D101型大孔树脂吸附，用体积分数为70％的乙醇洗脱，收集3倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CHCl3/MeOH混合溶剂，收集3倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，经高效液相色谱HPLC制备(色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝55∶45)，依次得到式I(33mg)、式II化合物(59mg)。结构确证数据与实施例1一致。

[0026] 实施例3

[0027] 体外测试本发明式I、式II化合物的葡萄糖激酶(GK)活化效力及EC50[0028] 按照专利CN102482267A(WO2011/013141)中记载的方法，测试本发明式I、式II化合物的葡萄糖激酶(GK)活化效力及EC50，结果显示，在1μM浓度下，式I和式II化合物在DMSO中的GK活性分别为281.5％和292.2％，其EC50均小于0.1μM。

[0029] 实施例4

[0030] 体内测试本发明式I、式II化合物的降血糖作用

[0031] 按照中国专利(申请号：201410759327.7)中记载的方法，测试本发明式I、式II化合物对糖尿病小鼠模型的降糖效果，结果表明给药2小时后，式I、式II化合物(剂量为250mg/kg)能使模型小鼠血糖下降63％。